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目的：构建叶酸（Folate， FA）、 TAT肽双靶修饰阿霉素脂质体（FA/TAT-LP-DOX），旨在实现FA主动靶向的同时，增强阿霉素脂质体的细胞摄取，从而提高其抗肿瘤效果；同时研究双靶脂质体FA/TAT-LP-DOX的摄取途径，阐明其发挥作用的机理。方法：通过酰胺化反应合成脂质材料长链DSPE-PEG5000-FA，加成反应合成短链DSPE-PEG2000-TAT，以薄层色谱（TLC）、红外光谱（FTIR）、氢谱（1H-NMR）、高效液相色谱（HPLC）等方法分别对合成产物进行表征。采用薄膜分散法及pH梯度法制备阿霉素脂质体（LP-DOX），后插入法制备双靶脂质体。通过测定粒径、Zeta电位、形态、包封率对脂质体进行表征。体外评价中以过度表达叶酸受体的KB细胞作为细胞模型。采用MTT法评价双靶脂质体的细胞毒性；通过荧光显微镜及流式细胞仪定性定量考察双靶脂质体的摄取效率；应用激光共聚焦显微镜观察双靶脂质体在细胞内的分布情况；最后通过流式细胞仪及共聚焦显微镜考察不同抑制剂的摄取抑制作用来阐明双靶脂质体的内吞机制。结果：脂质材料DSPE-PEG5000-FA经1H-NMR鉴定，其纯度约为75%，DSPE-PEG2000-TAT经HPLC计算，其TAT肽连接率约为95%。所制备双靶脂质体平均粒径为142.1nm，包封率为92.2%，Zeta电位为4.4mV，证明TAT肽的正电荷被成功掩蔽。透射电镜图（TEM）显示，双靶阿霉素脂质体分布均匀且呈球形。MTT实验表明，配体FA、TAT肽最佳密度分别为5%、2.5%，以此密度构建最优双靶脂质体FA/TAT-LP-DOX，与叶酸单靶脂质体FA-LP-DOX相比，显著（p<0.01）提高了细胞毒性。细胞摄取实验证实，TAT肽与FA存在协同作用，双靶脂质体显著地（p<0.01）提高了细胞摄取，其平均荧光强度为单靶叶酸脂质体的1.7倍，摄取速率为单靶叶酸脂质体的1.6倍。共聚焦显微镜及机制考察表明，双靶脂质体通过以网格蛋白为主的多种途径进入KB细胞，递送至溶酶体，并快速释放DOX入核。结论：本研究构建了粒径均一、包封率高的双靶阿霉素脂质体FA/TAT-LP-DOX，在保留FA主动靶向的基础上，赋予脂质体优越的细胞膜穿透能力，显著地提高了肿瘤细胞毒性。以网格蛋白为主的多种内吞途径促进了双靶脂质体的细胞摄取，有利于其发挥细胞毒作用。双靶修饰策略为设计同时具有靶向及穿透功能的纳米载体提供了新颖的思路及一定实验基础。