EGCG对ACC-M细胞株PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、NF-κB表达的影响

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目的:通过将EGCG与PI3K抑制剂LY294002分别、联合应用于ACC-M细胞,检测细胞的生存情况及Akt、p-Akt、NF-κB的表达情况,初步探讨EGCG对涎腺腺样囊性癌的作用机制。方法:1、MTT法测定不同浓度EGCG与LY294002分别作用ACC-M细胞24h、48h、72h的抑制率,计算药物半抑制浓度(IC50);将实验分为阴性对照组、阳性对照组(LY294002IC50)、EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组,测定48h细胞抑制率。2、普通光学倒置显微镜观察各组药物作用48h细胞形态学变化。3、流式细胞术检测各组药物作用48h细胞凋亡情况。4、Western blot检测各组药物作用48h后细胞中Akt、p-Akt、NF-κB的表达。结果:1、不同浓度的EGCG(62.5μM、125μM、250μM、500μM)与不同浓度的LY294002(6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM)分别作用ACC-M细胞24h、48h、72h,与阴性对照组相比EGCG、LY294002对ACC-M对细胞的抑制作用具有统计学差异(P<0.05)。药物作用48h时EGCG与LY294002的IC50分别为156.28μM与30.88μM。阳性对照组、EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组的48h细胞抑制率分别为51.65%、51.48%、31.52%和56.65%。2、细胞观察实验可见药物作用ACC-M细胞48h后,细胞数量减少、间隙增加,由多边形变为梭形,细胞脱壁,部分细胞漂浮在培养基中呈凋亡状态。3、流式细胞术示所有用药组细胞凋亡率均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);EGCG IC50组细胞凋亡率低于阳性对照组,而EGCG IC40+LY294002 IC10组细胞凋亡率高于阳相对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4、Western blot示,与阴性对照组相比,所有用药组的p-Akt表达降低(P<0.05);EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组的Akt、NF-κB表达量均低于阴性对照组(P<0.05)。结论:EGCG、LY294002均能抑制ACC-M细胞的增殖,EGCG IC40+LY294002 IC10对ACC-M细胞体外生长抑制效果最佳,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、NF-κB蛋白的表达情况有关。
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