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已有研究发现NO及iNOS在多种恶性肿瘤中呈高表达，如乳腺癌，胃癌，卵巢癌，黑色素瘤，宫颈癌等。NO和iNOS的表达程度与肿瘤的分化，转移，浸润能力成正相关。国内外有较多的研究发现抑制iNOS合成NO，可以在多个方面抑制肿瘤的发展。目前有较多的NOS抑制剂被研制开发出来，并且他们的作用已经得到肯定。1400W是具有高选择性的iNOS抑制剂之一。对iNOS的选择性较eNOS高出5000倍，较nNOS高出200倍。研究发现1400W主要通过与精氨酸特异性竞争iNOS精氨酸结合位点而发挥作用。但是迄今为止，对于NO,iNOS及其抑制剂对宫颈癌的作用研究较少，因此本课题利用宫颈癌宫颈癌Hela细胞株，研究iNOS在宫颈癌细胞株中的表达情况，观察iNOS抑制剂单独和联合顺铂对Hela细胞的作用，希望为宫颈癌的综合治疗提供理论基础。
一.宫颈癌Hela细胞中iNOS的表达
目的：了解iNOS在宫颈癌Hela细胞中表达情况。
方法：宫颈癌Hela细胞株复苏后培养，采用免疫组化法检测宫颈癌Hela细胞中iNOS的表达情况，应用 western blot方法检测细胞中iNOS蛋白表达情况。
结果：免疫组化法发现iNOS在宫颈癌Hela细胞中呈阳性表达，主要位于细胞浆内，部分位于细胞胞膜上。Western blot结果也提示宫颈癌Hela细胞中iNOS蛋白表达阳性，分子量为130kb。
二.iNOS抑制剂1400W及顺铂对宫颈癌Hela细胞增殖的影响
目的：了解1400W，顺铂对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。
方法：应用MTT检测1400W和顺铂对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用，其中顺铂浓度取0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，4mg/ml，8mg/ml，1400W浓度取20umol/L,40umol/L,分别观察24hr,48hr,72hr。
结果：1400W和顺铂均能抑制宫颈癌Hela细胞生长，其抑制作用与剂量相关，但未呈现时效关系。
三.iNOS抑制剂1400W及顺铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响
目的：了解1400W及顺铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。
方法：培养宫颈癌Hela细胞，分为对照组(培液)，顺铂组(顺铂4ug/ml)，1400W组(1400W40umol/L)和顺铂+1400W(顺铂4ug/ml+1400W 40umol/L)，采用流式细胞仪检测宫颈癌Hela细胞经作用24hr,48hr和72hr后凋亡情况。
结果：对照组，顺铂组，1400W组，顺铂+1400W组中，24hr后宫颈癌Hela细胞的凋亡率分别为(2.53±0.81)％，(9.00±0.40)％，(1.94±0.21)％和(15.75±1.69)％；48hr后宫颈癌Hela细胞的凋亡率分别为(5.65±0.00)％，(11.12±1.38)％，(4.09±0.52)％和(45.70±2.11)％；72hr后宫颈癌Hela细胞的凋亡率分别为(4.42±0.04)％，(25.30±0.22)％，(4.92±0.87)％和(60.34±0.98)％。其中顺铂组与对照组比较p<0.05，1400W组与对照组比较p>0.05，1400W联合顺铂组与对照组比较P值<0.05，与顺铂组比较P值<0.05。
四.iNOS抑制剂1400W及顺铂对宫颈癌Hela细胞iNOSmRNA表达的影响
目的：了解1400W及顺铂对宫颈癌Hela细胞iNOSmRNA表达的影响。
方法：培养瓶培养细胞，分为对照组(培液)，顺铂组(顺铂4ug/ml)，1400W组(1400W40umol/L)和顺铂+1400W(顺铂4ug/ml+1400W 40umol/L)，采用RT-PCR检测宫颈癌Hela细胞经作用24hr,48hr和72hr后iNOSmRNA表达情况。
结果：在对照组，顺铂组，1400W组，和顺铂+1400W组，作用24hr后宫颈癌Hela细胞iNOSmRNA表达量分别为0.72±0.15，0.58±0.04，0.65±0.20和0.34±0.12；作用48hr后宫颈癌Hela细胞iNOSmRNA表达量分别为0.98±0.25，0.47±0.02，0.70+0.36和0.31±0.08；作用72hr后宫颈癌Hela细胞iNOSmRNA表达量分别为0.72±0.05，0.40±0.06，0.62±0.12和0.17±0.05。其中顺铂与对照组比较p<0.05，1400W与对照组比较p>0.05，1400W联合顺铂与对照组比较P值<0。05，与顺铂组比较P值<0.05。
结论：本实验结果提示，iNOS在宫颈癌Hela细胞中呈阳性表达，1400W及顺铂均可抑制宫颈癌Hela细胞增殖。1400W联合顺铂可以明显增加宫颈癌Hela细胞凋亡率，抑制宫颈癌Hela细胞iNOSmRNA表达，并且较单独使用顺铂时作用更显著，而单用1400W时宫颈癌Hela细胞凋亡率及iNOSmRNA表达情况均没有显著差异，说明两者之间存在协同作用。联合iNOS抑制剂可以增强顺铂抗肿瘤的作用，这是一种很有希望的新辅助疗法，为宫颈癌的治疗提供了新的思路。