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研究目的:本研究旨在评价骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血血小板激活及免疫功能表型的变化,及其与出血和感染事件的相关性,深入探索血小板表型的改变对MDS患者出血和感染的影响。研究方法:本研究纳入天津医科大学总医院血液科诊断的MDS患者29例,正常对照组22名。根据IPSS-R评分,去甲基化药物(Hypomethylating Agents HMAs)用药史和血小板输注史将MDS患者分别分为较低危组和较高危组、未治疗组和治疗组及输血前组和输血后组。利用多参数流式细胞术(Multiparameter flow cytometry MFC)分别检测各组MDS患者以及正常对照组外周血血小板基础特征改变及相关表型的表达情况,包括前向散射(FSC)、侧向散射(SSC)、CD41a、激活功能表型CD62p和CD63以及免疫功能表型CD154和TLR4,并分析激活功能表型与出血风险的相关性,免疫功能表型与感染风险的相关性。研究结果:1、MDS患者外周血血小板基础特征的变化:各组MDS患者血小板FSC的中值荧光强度(FSC-MFI)和SSC-MFI与正常对照组相比无显著差异。较低危组、较高危组、治疗组、输血前组及输血后组患者血小板CD41a-MFI显著低于正常对照组(P=0.009;P=0.005;P=0.008;P=0.006;P=0.031),其余各组间无显著差异。2、MDS患者外周血血小板激活功能表型的变化:在血小板未激活时,各组MDS患者较正常对照组外周血CD62p阳性血小板百分比(CD62p+PLT%),CD63阳性血小板百分比(CD63+PLT%),CD62p-MFI及CD63-MFI之间均无显著差异(P>0.05)。经ADP激活后,较高危组、未治疗组及输血前组患者血小板CD63-MFI显著低于正常对照组(P=0.017;P=0.026;P=0.019),较高危组CD63+PLT%显著低于正常对照组(P=0.036)。各项指标在其余各组之间数值上有所不同,但均无显著差异。3、MDS患者外周血血小板免疫功能表型的变化:较高危组患者CD154-MFI和TLR4-MFI显著低于正常对照组(P=0.024;P=0.034),未治疗组患者CD154+PLT%、TLR4+PLT%、CD154-MFI及TLR4-MFI水平显著低于正常对照组(P=0.001;P=0.020;P<0.001;P=0.001),而且未治疗组患者的CD154+PLT%和TLR4+PLT%还显著低于治疗组(P=0.002;P=0.041)。血小板输注对MDS患者血小板免疫功能表型无显著影响。4、MDS患者外周血血小板表型表达情况与临床指标相关性分析:(1)激活功能表型CD62p+PLT%、CD63+PLT%、CD62p-MFI和CD63-MFI水平与出血事件均无明显相关性,但血小板计数(PLT)与出血事件呈明显负相关关系(r=-0.646,P<0.001);(2)CD62p+PLT%和CD62p-MFI水平与白细胞计数(WBC)呈负相关(r=-0.496,P=0.006;r=-0.498,P=0.006),与绝对中性粒细胞计数(ANC)呈负相关(r=-0.512,P=0.005;r=-0.442,P=0.016);(3)CD62p+PLT%和CD62p-MFI水平与凝血酶原时间(PT)呈正相关(r=0.409,P=0.028;r=0.489,P=0.007),与纤维蛋白原(FIB)呈负相关(r=-0.415,P=0.025;r=-0.510,P=0.005),与D-二聚体(DD)呈负相关(r=-0.547,P=0.002;r=-0.601,P=0.001),另外CD62p-MFI水平还与凝血酶原国际标准化比值(PT-INR)呈正相关(r=0.402,P=0.03);(4)CD154+PLT%、TLR4+PLT%、CD154-MFI及TLR4-MFI水平与感染的严重程度均无显著相关性(P>0.05)。结论:1、MDS患者与健康供者之间外周血血小板FSC和SSC水平无显著差异,提示MDS患者血小板体积及胞质内物质可能无显著改变;较低危组、较高危组、治疗组、输血前组以及输血后组患者的CD41a-MFI水平均低于正常对照组。这可能与MDS患者巨核细胞或血小板发育异常有关。2、血小板未激活时,MDS患者与健康供者的外周血血小板激活功能表型表达无差异。经ADP激活后,部分MDS患者外周血血小板激活功能表型的表达有所下调,其中以IPSS-R较高危的患者,未接受HMAs治疗的患者及未接受血小板输注的患者为主。提示未经治疗的较高危MDS患者更容易出现血小板激活功能受损,而HMAs治疗和血小板输注可能具有改善血小板激活功能的作用。3、部分MDS患者外周血血小板免疫功能表型的表达较健康供者有所下调。以IPSS-R较高危的患者和未接受HMAs治疗的患者为主,血小板输注前后MDS患者血小板免疫功能表型的表达无显著改善。提示未经治疗的较高危MDS患者更易发生血小板免疫功能受损,而HMAs治疗可能改善血小板的免疫功能,但是血小板输注对改善血小板免疫功能无显著作用。4、MDS患者血小板CD62p和CD63的表达与出血事件间无明显相关性,提示PLT仍是影响MDS患者出血风险的最主要原因;CD62p+PLT%和CD62p-MFI水平与WBC、ANC呈负相关,CD154和TLR4的表达与感染严重程度无显著相关性,提示人体内感染的发生可能会促进血小板激活,释放趋化因子及细胞因子,募集白细胞,促进炎症反应的发生,但血小板的免疫调节功能在机体抗感染过程中可能不起主要作用,中性粒细胞计数和功能仍是影响MDS患者感染风险的主要因素。CD62p+PLT%和CD62p-MFI水平与FIB和DD呈负相关,与PT呈正相关,其中CD62p-MFI水平还与PT-INR呈正相关,提示血小板激活会促进凝血级联反应的发生,高凝状态可能抑制血小板激活程度,而凝血功能不良则可能会促进血小板的激活。