论文部分内容阅读
目的：(1)初选苯妥英钠聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微粒(DPH-PBCA-NPs)的制备方法，并对制备工艺进行优化，建立DPH-PBCA-NPs最佳的制备方法和工艺。(2)利用Tween-80对DPH-PBCA-NPs进行表面修饰，探讨Tween-80对DPH-PBCA-NPs进行表面修饰的可行性。考察DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs体外释药规律，探讨其缓释效应。(3)利用癫痫动物模型评价DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs的抗癫痫疗效，探讨纳米载药系统的优越性。方法：(1)选择α-氰基丙烯酸正丁酯(α-butylcyanoacrylate，α-BCA)为载体，应用乳化聚合包入法、乳化聚合吸附法和界面聚合法制备DPH-PBCA-NPs，考察DPH-PBCA-NPs的粒径、形状、载药量、包封率和Zeta电位等指标，初选出制备方法。(2)通过单因素试验结合正交试验对初选DPH-PBCA-NPs的制备方法进行工艺优化，确立DPH-PBCA-NPs最佳的制备方法和工艺。(3)利用Tween-80作为表面活性剂对DPH-PBCA-NPs进行表面修饰，比较Tween-80修饰前后纳米微粒的变化。(4)采用动态透析法进行体外释药，对DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs体外释药规律进行研究。(5)构建氯化锂-匹罗卡品急性癫痫大鼠模型，利用视频脑电监测仪，观察脑电图动态变化过程和致痫大鼠的行为学改变，评估DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs的抗癫痫疗效。(6)统计学处理：采用SPSS 12.0统计软件包对所有数据进行统计，计量资料以均数±标准差((?)±s)表示，用t检验和方差分析对各组数据进行比较；计数资料采用x~2检验。P＜0.05有统计学意义。结果：(1)乳化聚合包入法制备的DPH-PBCA-NPs，透射电子显微镜显示纳米微粒相互粘连，形状不匀称，纳米粒度分析仪显示粒径分布不均匀，纳米胶体溶液中出现絮状物和沉淀。而乳化聚合吸附法和界面聚合法制备的DPH-PBCA-NPs，纳米微粒形状呈均匀球形，分散良好，呈现单一分布峰，分布集中。因此，初选出乳化聚合吸附法和界面聚合法，并对其制备工艺进行研究。(2)通过单因素试验考察了pH值、苯妥英钠用量、搅拌速度、搅拌时间以及反应物体积比(PBCA-NPs与苯妥英钠溶液)对乳化聚合吸附法制备的DPH-PBCA-NPs的粒径、载药量和包封率的影响，确定pH值为7、搅拌时间2h作为基本的制备条件。对苯妥英钠用量、PBCA-NPs胶体溶液体积和搅拌速度设计正交试验，确定苯妥英钠75mg、PBCA-NPs体积35ml、搅拌速度1，000rpm为最佳的制备条件。(3)优化后DPH-PBCA-NPs乳化聚合吸附法的制备工艺如下：当反应体积为40ml时，苯妥英钠用量75mg，PBCA-NPs用量35ml，搅拌速度1.000 rpm，反应体系的pH值为7，温度25℃，搅拌时间2h。该工艺条件制备的DPH-PBCA-NPs性状及各种指标如下：纳米微粒呈球形，形态均匀，分散性佳，平均粒径120.40±5.32nm，跨度0.57，载药量22.1+0.41％，包封率82.51±1.53％，Zeta电位-17.8mV。(4)通过单因素试验考察了pH值、苯妥英钠用量、三油酸甘油酯用量、水相与有机相体积比(W／O)以及搅拌速度对界面聚合法制备DPH-PBCA-NPs的粒径、载药量和包封率的影响，确定pH 7，搅拌速度800rpm作为基本的制备条件。对苯妥英钠用量、三油酸甘油酯用量以及水相与有机相体积比设计正交试验，确定苯妥英钠125mg、三油酸甘油酯0.15ml、水相与有机相体积比1：1为最佳的制备条件。(5)优化后DPH-PBCA-NPs界面聚合法制备工艺如下：当反应体积为30ml时，苯妥英钠量125mg，水相与有机相体积比(W／O)1：1，三油酸甘油酯0.15ml，反应体系pH值为7，搅拌速度800 rpm，1％(w／v)的Dextran-70，α-BCA为1％(v／v)，温度25℃，搅拌时间3h。该工艺条件制备的DPH-PBCA-NPs性状及各种指标如下：纳米粒的形态均匀，呈球形，分散性佳。平均粒径189.80±3.45 nm，跨度0.47，载药量39.82±0.56％，包封率95.56±1.35％，Zeta电位-34.8mV。(6)Tween-80修饰后DPH-PBCA-NPs的粒径减小，与未修饰的DPH-PBCA-NPs相比具有显著性差异(t=3.813，P=0.001)，Zeta电位也有明显的升高。体外释药结果表明乳化聚合吸附法和界面聚合法制备的DPH-PBCA-NPs及Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs均具有缓释性。(7)成功构建氯化锂-匹罗卡品急性癫痫大鼠模型，致痫大鼠在行为和脑电图上均表现出了癫痫持续状态。行为学结合脑电图考察DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs对致痫大鼠的抗癫痫疗效，Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs组有效率为91.67％，DPH-PBCA-NPs组有效率为54.55％，Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs疗效优于DPH-PBCA-NPs(x~2=3.923，P=0.048)和苯妥英钠(x~2=4.557，P=0.033)，DPH-PBCA-NPs的有效率高于苯妥英钠普通剂型(50％)，二者相比无显著性差异(x~2=0.043，P=0.835)。结论(1)乳化聚合吸附法和界面聚合法均可以制备出粒径合适、形态均匀、载药量和包封率良好的DPH-PBCA-NPs，界面聚合法制备的DPH-PBCA-NPs稳定性优于乳化聚合吸附法。(2)Tween-80修饰后的DPH-PBCA-NPs粒径减小，Zeta电位升高，有利于透过血脑屏障。体外释药显示乳化聚合法吸附法和界面聚合法制备的DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs具有较好的缓释性。(3)DPH-PBCA-NPs和Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs能够改善致痫大鼠的行为学和脑电图，具有抗癫痫疗效。Tween-80修饰的DPH-PBCA-NPs疗效优于DPH-PBCA-NPs和苯妥英钠普通剂型。