目的：最新研究发现AZGP1蛋白与肝癌密切相关,本课题将AZGP1进行原核重组表达、纯化并制备多克隆抗体,初步评估其在肝细胞癌诊断中的价值,为其在临床上的应用奠定基础。方法：应用RT-PCR技术从肝癌组织中扩增获得AZGP1全长,将其克隆至原核表达载体pET21a(+)-MBP内,转化大肠杆菌DH10B, IPTG诱导其在大肠杆菌BL21中的表达,His-tag磁珠纯化试剂盒纯化融合蛋白AZGP1, SDS-PAGE鉴定。然后用纯化的AZGP1融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。采用Western-blot, ELISA技术鉴定其抗体的特异性及敏感性,并测定肝癌病人血清中AZGP1蛋白的含量,评估其在肝细胞癌诊断中的特异度和敏感度。结果：1.应用RT-PCR技术,从肝癌组织中扩增获得大约900bp的AZGP1全长,通过阳性菌落PCR、酶切鉴定及测序鉴定表明：成功构建了AZGP1的原核表达载体pET21a(+)-MBP-AZGP12.通过IPTG诱导,融合蛋白AZGP1在大肠杆菌BL21中得以高效表达,并以包涵体形式存在。变性条件下,经His-tag磁珠纯化试剂盒纯化,获得较高纯度的融合蛋白,经过复性并鉴定,融合蛋白恢复活性。3.用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,成功获得AZGP1的多克隆抗体,经间接ELISA检测,抗体效价为1：12800。4.用多抗检测肝细胞癌患者血清发现,相对于对照组AZGP1在肝癌患者血清中含量升高。结论：1.构建了AZGP1的原核表达载体pET21a(+)-MBP-AZGP1,纯化并复性了融合蛋白MBP-AZGP1。2.获得具有较高的特异性及敏感性的抗AZGP1多克隆抗体。3. AZGP1在肝细胞癌患者血清中表达上调,。