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本文以雄性成熟Sprague-Dawley大鼠(体重180-230g)为材料,使用原位杂交(insituhybridization,ISH),和免疫印迹(Westernblot)方法分别研究了多胺对大鼠部分肝切除(partialhepatectomy,PH)后诱导的再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶(ornithinedecarboxylase,ODC)基因转录量和蛋白含量的变化。旨在探讨多胺在肝脏再生中的作用,为阐明肝再生的机理奠定基础。结果如下:
(1)在正常完整肝脏(Ph0h),ODC基因转录量、蛋白量较低。
(2)PH后,再生肝细胞ODCmRNA量和蛋白表达量都快速升高。其中ODCmRNA量于2h较0h升高近6倍,存在显著性差异(P<0.05),4h达到峰值,且与0h相比升高近8倍(P<0.01),随后逐渐降低。ODC蛋白量于PH后4h出现第一个表达峰,于0h相比有显著差异(P<0.05),随后缓慢降低,但仍维持高表达,且显著高于0h水平。
(3)外源多胺处理后,再生肝ODCmRNA水平和蛋白水平的变化趋势与对照组相似,即先升高后下降。但不同种类、剂量的多胺结果差异明显:
①在所观察到的整个肝再生期间,高剂量腐胺(20mg/kg体重)处理组mRNA水平始终低于对照组,特别在PH后2h、4h和10h与对照组相比存在显著性差异(p<0.05);低剂量(0.02mg/kg体重)的腐胺处理组,只在4h和12h显著高于对照组。
②高剂量精脒(0.15mg/kg体重)处理组的ODCmRNA水平始终低于对照组(在10h例外);而低剂量(0.03mg/kg体重)处理组则不同,ODCmRNA水平表现出先抑制(在2h)后促进(在4h和6h)的特点。
③精胺的作用与精脒相似。
④在所观察到的整个肝再生期间,不同剂量的多胺处理后,大鼠再生肝细胞ODC蛋白水平变化和其相应时间点ODCmRNA变化相一致。但蛋白量的增加明显低于mRNA含量的增加。
以上结果表明,不同浓度的多胺(主要是精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞ODC基因转录和蛋白表达存在着反馈调节作用。作用时间在肝再生刚开始4h左右最为明显;调控的能力也有差别,依次为精脒、精胺和腐胺。