随着再植外科的不断进步,断肢(指)再植成活率高达95%,但再植肢体术后功能恢复仍不能令人满意。研究证明,IR损伤对再植肢(指)体的功能恢复有重要的影响。如何预防和减轻IR损伤对术后功能的影响已引起重视,近年的研究表明低能量激光照射,中药黄芪、红花、三七以及复合方剂等可减轻组织器官的再灌注损伤,改善受累组织的微循环,但对再植后肢(指)体关节的再灌注损伤和功能恢复有何影响,目前尚未见相关报道。目的:本研究在成功建立兔膝关节缺血再灌注损伤模型的基础上,观察低能量激光照射、消灵仙软膏外敷以及两者联合应用对关节滑膜及软骨的影响,为临床减轻再植后的肢(指)体再灌注损伤,促进功能恢复提供实验依据。方法:100只健康成年新西兰大耳白兔(雌雄不拘,体重2.88(0.38kg),随机分成单纯缺血再灌注组、激光照射组、中药消灵仙软膏组、激光照射+中药消灵仙组(每组25只)。每组再随机分为5个小组,每小组5只,即缺血8小时再灌注1w、2w、4w、8w、12w。在各相应的时间点活杀动物取材后,测定关节滑液中乳酸含量;制备光镜标本观察关节滑膜、软骨的组织形态变化;制备电镜标本观察滑膜组织超微结构的变化;制备滑膜组织匀浆,测定脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和一氧化氮合酶(NOS)活力的变化;免疫组化SABC法观察滑膜组织中血管变化。并采用SPSS10.0统计软件进行方差分析。结果:1. 大体观察 对照组术后2w内,膝关节均有不同程度的肿胀,而激光理疗或/和中药软膏治疗的B、C、D组1w后肿胀明显减轻;2w后可见动物术侧肢体活动度治疗组较对照组有不同程度的增大。2w内,取材时见对照组关节腔内滑液浑浊(80%),60%有血性渗出;而治疗组滑液量在治疗2w后均呈蛋清样透明。8~12w时,治疗组滑膜基本正常,对照组部分动物出现滑膜增生。关节被动活动度治疗组不同程度地大于对照组。2. 组织学变化对照组IR后1w,关节滑膜内血管扩张,伴有毛细血管充血;电镜下可见毛细血<WP=8>管完整性受损,EC胞膜出现髓鞘样变。细胞间质明显水肿,表层滑膜细胞有坏死脱落,间质散在数量不等的炎性细胞。IR2w时,滑膜间质中度水肿,间质内大量炎性细胞浸润,呈肉芽样变;IR4w,坏死的滑膜组织内可见大量的成纤维细胞,表层滑膜细胞向脱落处延伸生长;8~12w,滑膜组织纤维增生,血管明显减少,且毛细血管呈不同程度的狭窄或闭塞;间质偶见炎性细胞浸润。激光及药物治疗组 IR后1~2w,滑膜间质轻度水肿,未见毛细血管充血及EC损伤,有少量炎性细胞浸润,未见表层滑膜细胞坏死、脱落;8~12w,滑膜间质中毛细血管数无明显减少,可见胶原纤维轻度增生。联合治疗组 联合应用低能量激光照射+中药消仙灵软膏,治疗后1w,变化基本同单纯治疗组,病变程度相对较轻。2w时,见滑膜间质少量的多形核细胞浸润,有少量新生血管;4w,滑膜间质胶原纤维无明显变化,表面滑膜细胞无增生,未见炎性细胞浸润;12w,可见滑膜细胞层次排列清晰,未出现间质胶原纤维增生。免疫组化标记结果,在IR后1~2w对照组滑膜组织中血管数明显减少;而各治疗组血管数减少的程度较对照组轻;对照组在IR 2w后滑膜组织中毛细血管曾有一过性修复。IR后8~12w,对照组毛细血管数随组织的纤维化明显减少;而各治疗组血管数变化不明显,以联合治疗组最多。IR4w,对照组软骨表面粗糙,表层细胞有脱落现象,柱状层细胞稀疏,排列紊乱,层次分辨不清,甚至被纤维化骨所取代。而激光组、中药组及激光+中药组滑膜细胞及软骨细胞的变化不明显,并随时间的延长而趋于正常;联合治疗组的形态学变化优于激光组、中药组。3. 在同一时间点,与对照组组比较,激光照射组、中药组及激光+中药消灵仙组滑液中乳酸、滑膜中MDA含量显著降低(P<0.05),滑膜匀浆中SOD、NOS活力显著增高,差异显著(P<0.05)。关节活动度在IR后4、8、12w对照组逐渐降低,治疗组逐渐增大,在同一时间点,治疗组关节活动度均显著大于对照组(P<0.05)。结论:1. 低能量激光理疗和中药消灵仙软膏均能减轻关节滑膜的脂质过氧化程度,增强对自由基的清除能力,减轻关节的缺血再灌注损伤。 2. 低能量激光理疗和中药消灵仙软膏均能促进IR后滑膜组织毛细血管的再生,维持微循环血液灌注,改善滑膜组织微循环;二者联合应用,具有一定的协同效应,效果更佳。