目的肺癌在形成前经历了一系列形态学及分子水平的改变,从正常的支气管肺泡上皮细胞演变成为各种形态学表现的肺癌是一个复杂漫长的多阶段多步骤的癌变过程,支气管上皮细胞增殖／分化的控制失调是其中的根本原因。在致癌剂如苯并芘促进肺部细胞恶化和促进肿瘤成长的过程中,这些对于肺正常细胞如支气管上皮细胞的作用是潜移默化从量变向质变恶性转化进行时的。研究表明酚类等抗氧化剂可以拮抗这一作用。人们致力于寻找良好的化学预防策略及物质,干预致癌物代谢,不使其活化成完成致癌物或者抑制、防止致癌物与细胞DNA结合,抑制癌前病变演变成癌或使其逆转成正常细胞。在本课题组的前期研究中,证实3,4-苯并芘油剂经皮肺内注射构建大鼠肺肿瘤模型是一种简单可靠的肺肿瘤动物模型的构建方法,其中肿瘤的病理组织学类型以非小细胞肺癌为主。我们通过二维凝胶电泳获取未成瘤大鼠3,4-苯并芘注射旁肺组织与成瘤大鼠癌旁肺组织的差异表达蛋白质图谱,从而筛选大鼠肺组织微环境中与3,4-苯并芘诱导大鼠原发肺癌发生相关的蛋白质点。这些蛋白质点是包括DJ-1在内的9个质点,我们认为是与3,4-苯并芘肺内注射后未成瘤大鼠抑制肺癌形成相关的蛋白质点。提示肿瘤微环境中的DJ-1蛋白可以作为化学预防治疗癌症的靶点,化学预防可以在早期对致癌因素进行控制,通过对微环境中多种细胞及细胞因子的干预而影响肿瘤表型。肿瘤微环境靶点众多,从中挑选DJ-1作为分子靶点及寻找其定位细胞是第一步,弄清微环境中蛋白分子水平的变化对肿瘤细胞的影响,从而验证靶点蛋白及定位细胞的作用及与绿茶(酚类)肺癌预防的关系。方法实验第一部分,构建3,4-苯并芘油剂经皮肺内注射大鼠肺肿瘤模型,80只7-8周龄雌性SD大鼠,体重180-220g,随机分为2组,A组与B组各40只。A组接受3,4-苯并芘-玉米油肺内注射,B组接受玉米油肺内注射。两组大鼠采用相同普通饲料饲养,以水为饮料。32周处死大鼠,获取成瘤鼠和未成瘤鼠的苯并芘注射旁肺组织,验证肺组织抑制肺癌蛋白点DJ-1表达水平及主要定位细胞。DJ-1靶向siRNA转染人支气管上皮细胞,从mRNA水平和蛋白水平研究转染后DJ-1基因的表达下调的效应,检测转染DJ-1靶向siRNA转染HBE细胞对细胞增殖及凋亡的影响。实验第二部分,建立人支气管上皮细胞和肺腺癌细胞的共培养模型,分成三组,A组为单独肿瘤细胞培养组即空白组,B组为未处理的上皮细胞和肺腺癌细胞共培养组即对照组,C组为转染靶向DJ-1的siRNA后的上皮细胞和肺腺癌细胞共培养组即实验组。研究各组细胞生长增殖曲线及细胞周期凋亡水平及三组的裸鼠移植瘤实验。第三部分,构建3,4-苯并芘油剂经皮肺内注射大鼠肺肿瘤模型,60只7-8周龄雌性SD大鼠,体重180-220g,随机分为2组,A组与B组各30只。均接受3,4-苯并芘-玉米油肺内注射,两组大鼠采用相同普通饲料饲养,A组以1%绿茶为饮料,B组以水为饮料。16周处死大鼠,从mRNA水平和蛋白水平比较两组大鼠苯并芘注射旁肺组织的DJ-1基因表达差异。用绿茶有效成分(EGCG)处理支气管上皮细胞,从mRNA水平和蛋白水平测定上皮细胞中DJ-1基因表达的时间效应和剂量效应关系。结果成功构建3,4-苯并芘油剂经皮肺内注射大鼠肺肿瘤模型,免疫组化发现DJ-1主要表达于上皮细胞,且组间表达存在明显差异,未成瘤组肺组织表达水平较成瘤组明显降低。定位苯并芘促进肺癌发生过程中,大鼠肺组织微环境防癌作用的位于支气管上皮细胞的靶点DJ-1蛋白。DJ-1靶向siRNA转染HBE细胞,能有效的从mRNA水平和蛋白水平下调DJ-1基因的表达,在一定转染浓度对HBE细胞的增值及凋亡无明显影响。第二部分细胞实验,C组中肺腺癌细胞的增殖受到增殖抑制,细胞周期阻滞及凋亡水平较前2组增高。各组裸鼠移植瘤实验提示C组与A组的成瘤时间及成瘤体积存在差异,C组肿瘤的平均体积指数小于A组。第三部分,A组苯并芘注射旁肺组织DJ-1基因mRNA水平和蛋白水平较B组明显降低。绿茶有效成分(EGCG)能有效地下调支气管上皮细胞中的DJ-1蛋白的表达水平,并呈一定剂量和时间效应。结论苯并芘肺内注射构建大鼠原发肺肿瘤过程中,位于支气管上皮细胞DJ-1蛋白可能是大鼠肺组织微环境抑制肺癌的靶点蛋白之一。下调支气管上皮细胞中的的DJ-1蛋白的表达水平,对共培养的肺腺癌细胞增殖及成瘤性有抑制作用。上皮细胞中这个蛋白水平的改变可能参与抗促癌剂(茶酚类)拮抗促癌剂肺癌预防作用。