吸入引起肺损伤的有毒化学物质中，以全氟异丁烯(PFIB)的毒性最强。PFIB常温下为气态，常出现于聚氟工业的副产物中，同时也是含氟塑料Teflon高温分解和燃烧产物之一。吸入后引起严重肺水肿，病人因呼吸道阻塞窒息死亡。至今没有特异的有效防治手段。 在2003年抗击SARS的战役中，为指导临床中药治疗，国家科技部及时启动了“十五"863重大科技攻关课题：“治疗SARS中药筛选研究”。调查及临床资料显示，非典型肺炎死亡的主要原因是肺水肿。本课题组以PFIB吸入肺水肿动物模型参与了“对抗肺水肿中药筛选研究”。结果显示在10种候筛中成药中，清开灵注射液对抗PFIB吸入肺水肿效果最好，主要表现在湿肺／体比显著降低(清开灵治疗组100．6+9．8VsPFIB中毒对照组141．8~28．6)，显著改善支气管肺泡灌洗液中蛋白漏出(清开灵治疗组3．5l：k1．32VsPFIB中毒对照组6．33~3．60mg／mD，显著提高存活率(清开灵治疗组71．4％VsPFIB中毒对照组10．7％)。清开灵的以上作用都具有明显的剂量效应依赖关系。同时清开灵在其它肺损伤模型中也得到类似的结果，并已被国家科技部推荐为治疗SARS辅助用药，产生了较好的社会效益。 上述实验结果提示：1)PFIB吸入性肺损伤的发病机制与其它病因急性呼吸窘迫综合征(ARDS)具有一定的共性，针对有毒化学物质吸入肺损伤的研究成果可能对其它病因ARDS具有一定的普遍指导意义；2)清开灵有效对抗PFIB吸入肺损伤属首次发现，开辟了中药防治有毒化学物质吸入肺损伤的新研究方向。因此我们提出以下问题：1)清开灵方中对抗肺水肿的有效成分有哪些?2)它们之间是怎样的相互作用关系?3)它们是通过怎样的机制发挥抗肺水肿作用?为回答这些问题，本课题首先通过拆方研究，探讨各组分的抗化学性肺水肿效果；并通过组方实验，揭示各有效组分的作用关系，为进一步机制研究奠定充分的物质基础；通过机制探索，结合文献已有的研究成果，寻找化学性肺损伤的主攻方向。 按各组分特点和制备工艺的要求，首先将清开灵拆分为4个部位：1)板蓝根、栀子、金银花提取物；2)水牛角、珍珠母提取物；3)黄芩甙；4)总胆酸(牛胆酸和猪胆酸)。以PFIB吸入肺损伤小鼠模型，考察以上4个部位和清开灵全方的效果，发现部位4(总胆酸)的效果最好，表现在显著降低各项肺系数和BALF中蛋白含量：并显著改善PFIB吸入死亡率。黄芩甙和栀子提取物等非胆酸组分无对抗PFIB吸入肺水肿作用。两因素析因分析证明清开灵方中非胆酸组分无对抗PFIB吸入肺水肿作用，对总胆酸组分无协同促进作用。总胆酸中猪胆酸效果较强，与牛胆酸无相互协同作用。 在小鼠冷冻伤血管源性脑水肿模型上，胆酸的效果优于清开灵全方和地塞米松，进一步证明胆酸是清开灵方中不可或缺的主药。而在二甲苯致炎模型上，氢化可的松的效果优于清开灵，表现为显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓炎症肿胀和皮肤毛细血管渗出，但氢化可的松并不能对抗PFIB吸入肺水肿。以上结果说明二甲苯致炎模型与PFIB吸入肺水肿模型的损伤机制不同；清开灵的抗损伤机制也不同于氢化可的松。通过考察胆酸的同系物(去氧胆酸、异去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸)，十二烷基磺酸钠(SDS)，吐温80等表面活性剂的对抗PFIB致肺水肿作用，并测定各表面活性剂临界胶团浓度(CMC)值，发现各种表面活性剂均具有对抗PFIB所致肺水肿作用，且表面活性越强，抗肺水肿作用越强，致死毒性也越强。说明清开灵的非激素样的作用机制可能源自其表面活性作用。 推测：胆酸类药物通过表面活性作用，屏蔽组织蛋白的带电基团，抑制蛋白间相互识别和相互作用，即在PFIB吸入肺水肿模型中，胆酸抑制蛋白水解、抑制蛋白磷酸化等，从而保护气血屏障的完整性。为深入探讨胆酸对大鼠肺微血管通透性保护作用，首先原代培养了大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)，并进行形态特征和特异性抗原鉴定。通透性研究发现PFIB染毒动物血清与正常动物血清相比，对RPMVEC单层通透性的影响无显著差异；而针对染毒动物肺组织匀浆的实验却得到阳性结果，同时此效应可被胆酸显著抑制。这一结果说明PFIB吸入所引起的直接和间接损伤因素主要集中在肺脏，这些损伤因素很可能在血液中分布很少，不能引发其他脏器的损伤。血管内皮细胞钙粘蛋白(VE)是组成内皮细胞间粘附连接的重要蛋白，Westernblot结果显示PFIB染毒后8h起，肺组织中VE-cadherin含量显著降低，而给予胆酸预防可对抗VE-cadhefin的下调。肺组织蛋白质组学研究显示吸入PFIB后，血浆白蛋白大量渗出并滞留在肺组织中，肺组织启动对急性炎症应激因素的应答反应，诱导肺内小热休克蛋白(HSP27)合成增加。 通过以上研究发现：D清开灵注射液可有效对抗PFIB吸入肺水肿；2)总胆酸是清开灵对抗PFIB吸入肺水肿的有效部位；3)清开灵方中非胆酸组分无对抗PFIB吸入肺水肿作用，对总胆酸组分无协同促进作用；4)总胆酸中猪胆酸效果较强，与牛胆酸无相互协同作用；5)清开灵方中总胆酸组分可有效减轻冷冻伤血管源性脑水肿；6)清开灵的抗损伤机制不同于氢化可的松；7)清开灵非激素样的机制可能与表面活性作用相关。8)PFIB吸入所引起的直接和间接损伤因素主要集中在肺脏，与染毒动物血清不同，染毒动物肺组织匀浆刺激可显著升高RPMVEC单层通透性，此效应可被胆酸显著抑制；7)PFIB吸入可引起肺组织中VE-cadherin含量显著降低，而给予胆酸预防可对抗VE-cadherin的降低。8)吸入PFIB后肺组织启动对急性炎症应激因素的应答反应，诱导肺内小HSP27合成增加。 以上的研究结果确立了清开灵方中胆酸对抗PFIB吸入肺损伤的地位，并初步提出胆酸的表面活性作用与其药理毒理相关的学说。这些未曾见诸报道的新发现提示:1)运用现代药理学手段发掘祖国中药资源具有广阔的前景；2)血气屏障结构和功能改变将是化学性肺损伤未来研究的重点。