蒙药漏芦花化学成分与抗炎活性研究

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蒙药漏芦花系菊科植物祁州漏芦[Rhaponticum uniflorum(L.)DC]的干燥花(LLH),蒙药名为洪古日朱勒,具有杀“粘”、止刺痛、清热、解毒、理气、止痛、解表等作用,用于肠刺痛、瘟热、发症、结喉、麻疹、毒热、心热、讧热、炽热、血热、新陈热、伤热等。本论文首先通过体内、体外抗炎活性筛选实验确定了漏芦花抗炎有效部位,继而在体外抗炎药效实验的指导下,从漏芦花抗炎有效部位中分离得到10个单体化合物,并通过体外药效实验确定了单体化合物的抗炎活性,初步阐明了漏芦花抗炎物质基础,为漏芦花的开发利用提供了科学依据。方法:本论文采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀急性炎症模型和棉球致大鼠肉芽肿慢性炎症模型,对漏芦花进行了体外抗炎活性筛选,确定了漏芦花抗炎有效部位;采用AB-8型大孔吸附树脂制备了漏芦花抗炎有效部位,并以硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱层析、重结晶等方法对漏芦花抗炎有效部位进行了化学成分分离,通过理化性质及波谱数据鉴定了化合物化学结构;以脂多糖刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7体外抗炎模型指导漏芦花抗炎活性成分分离纯化,并对单体化合物进行了活性评价。结果:通过体内抗炎活性实验,结果显示漏芦花药粉组和醇提取物组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀具有显著抑制作用(与模型组比较分别P<0.05,P<0.01);漏芦花药粉组和醇提物对角叉菜胶致大鼠足肿胀致炎后8 h、10 h均有显著抑制作用(分别P<0.05,P<0.01);漏芦花药粉组和醇提物组对棉球致肉芽肿均有显著减轻作用(分别为P<0.01,P<0.001);而且醇提物组抗角叉菜胶致足肿胀和棉球致炎症效果均强于阳性药和药粉组。通过体内抗炎活性筛选实验确定了蒙药漏芦花抗炎有效部位,继而以体外抗炎活性实验指导,进一步从蒙药漏芦花抗炎有效部位分离得到两个主要抗炎有效部位(A2-2和A2-3),其对脂多糖刺激RAW264.7细胞NO释放抑制率达到89.94%和75.43%,最佳抑制浓度为400μg/ml(p<0.01)。从漏芦花抗炎有效部位(A2-2)中分离得到10个单体化合物,利用理化性质及波谱数据分别鉴定为六羟基胆甾烷-7-烯-6-酮(1)、β-谷甾醇(2)、α-(反-3-甲氧基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基苯亚甲基)-β-(3,4-二甲氧基苄基)-γ-丁内酯(3)、木樨草素(4)、芹菜素(5)、槲皮素(6)、槲皮苷(7)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(8)、硬脂酸(9)、没食子酸(10);除化合物2,6以外,其他化合物均为首次从漏芦花中分离得到。应用脂多糖刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7体外抗炎模型对上述10个单体化合物(样品浓度0.39~400μg/ml)进行了抗炎活性评价,结果显示除了β-谷甾醇、硬脂酸外,其他8种单体化合物均表现出一定的抑制NO生成的活性,特别是化合物(3),首次报道具有抗炎活性。结论:通过体内、体外抗炎活性实验,均证明了漏芦花具有较强的抗炎活性,我们利用现代分离纯化技术,从漏芦花抗炎有效部位中分离得到10个单体化合物,其中8个化合物具有抗炎活性,初步揭示了漏芦花抗炎机制。
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