一种基于量子点荧光微球的高灵敏度免疫层析技术初步研究

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量子点具有宽的吸收峰,窄而对称的发射峰,且发射峰(即发光颜色)随尺寸可调,以及较高的荧光强度、较强的抗光漂白能力等特点,与传统有机染料相比具有更优越的性能,是一种极具潜力的荧光探针制备物。近年来在生物与医学免疫检测方面得到飞速的发展,同时,在食品安全检测方面也不断渗透漫延。因其具有优越的光学性能,有望突破胶体金免疫层析检测,制备出更为灵敏的量子点免疫层析快速检测试纸条。本项工作围绕量子点的免疫检测体系,主要开展以下方面的研究:1.制备MPA稳定的水溶性CdTe量子点,探讨了最佳的合成条件,随着回流时间的延长,得到一系列由绿色过渡到红色的CdTe量子点,并对不同时间取得的样品进行了紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、TEM等表征。对其纯化和稳定性能也做了相应的探讨,发现透析不适合量子点纯化,体系pH8-10有利于量子点的稳定。2.以红色CdTe量子点作为代表,小鼠IgG作为模式抗体,用免疫层析法探讨了量子点与抗体的最佳偶联方式,先后对比了直接偶联、EDC与NHS单独最为偶联剂、EDC与NHS混合作为偶联剂这三种方法制备量子点探针,免疫层析结果显示EDC与NHS混合作为偶联剂(质量比3:4)制备得到的探针具有优越的性能。直接偶联与以NHS作为偶联剂制备的探针性能较差,不适合实际应用。3.为了得到更高荧光强度的荧光粒子,从两个方面入手提高量子点荧光强度:第一,制备核壳型量子点以期提高量子点荧光强度;第二,制备CdTe@SiO2纳米粒子以期提高单个纳米粒子的荧光强度。通过实验结果来看,水相制备的核壳型纳米粒子荧光强度并未得到改善,反而降低。反相微乳液制备的CdTe@SiO2纳米粒子因为实验试剂等影响,荧光强度大幅度下降,更不适合于检测分析用。4.制备高强度的SiO2/CdTe纳米粒子探针,用反相微乳液或史道伯法合成50-500 nm的二氧化硅纳米粒子,用硅烷偶联剂APTES使其氨基化,然后用偶联剂EDC与NHS将其与CdTe量子点偶联,制备得到高强度的荧光微球。5.经过一系列优化实验,以小鼠IgG与羊抗小鼠互为抗原抗体组装荧光微球免疫层析体系,经过与胶体金免疫层析对比,初步判断灵敏度比胶体金免疫层析体系高4-20倍。
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