论文部分内容阅读
第一部分缺血预处理对大鼠部分肝脏切除术后残留肝脏保护作用及机理研究.前言:自1963年美国Starzl教授主持完成人类第一例临床肝脏移植术以来,肝脏移植技术日趋成熟,已成为治疗终末期肝脏疾病的有效方法.但随着肝脏移植术越来越多的开展,供肝短缺问题日益明显.活体肝脏移植术(Living donor livertransplantation,LDLT)为克服尸体供肝尤其是儿童供肝短缺,并为无脑死亡法律国家与地区开展肝移植术开辟了一条新途径.LDLT的供体多为与受体有血缘关系的亲属,供肝和受体的组织相容性好,而且冷缺血时间较短,供肝质量好.但LDLT的肝脏供体是正常人,术中即要保证供肝的质量,更要保护供体残留肝脏功能及其生命安全,受体安全第一.在LDLT中,切取活体部分供肝时常需阻断肝脏血流以减少出血和确定供肝切除线.因此供体残留肝脏存在热缺血再灌注损伤.受体残留肝脏损伤可影响其肝功能恢复甚至威胁其生命安全.因此在LDLT术中,供体残留肝脏热缺血再灌注损伤的保护十分重要.缺血预处理(Ischemic Preconditioning,IPC)是指器官在一次较长的缺血再灌注事件之前的短暂的缺血再灌注过程.近年来的研究发现IPC对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用.一氧化氮(Nitric oxide,NO)介导了IPC对缺血再灌注肝脏的保护作用.IPC对LDLT术中供体残留肝脏的热缺血再灌注损伤是否具有保护作用?该实验在对SD大鼠肝脏进行解剖观察的基础上建立大鼠部分肝脏切除术模型,探讨IPC对大鼠部分肝脏切除术后残留肝脏是否有保护作用,并通过观察肝脏组织NO浓度及内皮型NO合成酶(eNOS)mRNA和诱导型NO合成酶(iNOS)mRNA的表达探讨其作用机理,为临床LDLT中供体残留肝脏的保护提供理论指导.结论:1.SD大鼠肝脏分为右叶(又分为右下叶和右上叶)、中叶(又分为右中叶和左中叶)、左侧叶、尾状叶(又分为尾状前叶和尾状后叶),其占全肝重量比分别为23％(7%和16%)、36%(24%和12%)、32%和9%(5%和4%).这对建立大鼠部分肝脏切除术和小体积肝移植模型有指导意义.2.IPC对大鼠部分肝脏切除术后残留肝脏的热缺血再灌注损伤有保护作用.3.NO介导了热缺血再灌注对大鼠部分肝脏切除术后残留肝脏的损伤.4.IPC对大鼠部分肝脏切除术后残留肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用是通过促进肝脏再灌注早期eNOSmRNA的表达和抑制其稍后iNOSmRNA的表达而实现.5.IPC对大鼠部分肝脏切除术后残留肝脏缺血再灌注损伤的保护作用对肝脏外科中部分肝脏切除术后肝功能的保护尤其是活体部分肝移植术中供体残留肝脏的保护研究有指导意义,值得进一步研究.第二部分缺血预处理对大鼠小体积供肝的保护作用及机理研究.前言:在LDLT中,切取活体部分供肝时常需阻断肝脏血流以确定供肝切除线和减少出血.因此供肝存在热缺血再灌注损伤,另外还存在大约2h的冷缺血损伤.材料和方法:1.大鼠小体积肝移植模型的建立及实验分组采用健康雄性SD大鼠,体重250~300g.用原位肝叶切除法获取小体积供肝,受体和供体为体重和肥瘦相同或相近(相差3g以内)的大鼠.供肝灌注前切除其左侧叶(约占大鼠肝脏重约32%)获得约70%小体积供肝.供肝植入方法与全肝移植术相同,参照Kamada和Calne的双袖套法.120只大鼠均分为以下3组(n=20):(1)无热缺血组(Nonwarm Ischemic,NWI):供肝游离后切除其左侧叶,由腹主动脉灌注0~4℃肝素乳酸林格氏液,灌注后切取供肝.供肝修剪后植入受体大鼠.冷缺血时间为2h.(2)单纯缺血再灌注组(Ischemia,ISC):供肝游离后阻断全肝血流25min,期间切除肝脏左侧叶,热缺血25min后由腹主动脉灌注0~4℃肝素乳酸林格氏液,灌注后切取供肝.供肝修剪后植入受体大鼠.冷缺血时间为2h.(3)缺血预处理组(Ischemic Preconditioning,IPC):阻断全肝血流前行缺血预处理,即阻断全肝血流10min后开放10min,再阻断全肝血流25min,其余步骤同第2组.2.观测指标及检测方法.2.1各组受体大鼠于术前1d、术后1、2、3及5d断尾取血0.5ml,用自动生化分析仪检测其血清天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)及丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT).2.2. NWI组于供肝灌注前及植入后0.5、1、2、3h取肝组织0.6g;ISC组于热缺血前及植入后0.5、1、2、3h取肝组织0.6g;IPC组于IPC前、IPC后及植入后0.5、1、2、3h取肝组织0.6g.用硝酸还原法检测其NO浓度,用荧光定量-PCR法检测其eNOSmRNA和iNOSmRNA的表达.3.统计学分析结果.用x±s表示.结果分析采用t检验或t检验,P<0.05时差别有显著性.结论:1.IPC对大鼠小体积供肝的缺血再灌注损伤有保护作用.2.NO介导了缺血再灌注对大鼠小体积供肝的损伤3.IPC对大鼠小体积供肝缺血再灌注损伤的保护作用是通过促进移植肝脏再灌注早期eNOSmRNA的表达和抑制其稍后iNOSmRNA的表达而实现4.IPC对小体积供肝缺血再灌注损伤的保护作用对临床活体部分肝移植术中活体供肝的保护研究有指导意义,值得进一步研究.