1978年,世界第一例试管婴儿Louis Brown诞生的消息传来,世界各国的人们集聚无比兴奋的心情与追逐先进的欲望,纷纷开始开展这项技术。随着辅助生育技术(assisted reproductive technology,ART)的发展,胚胎冷冻技术已经成为其发展不可分割的一部分。尽管人类的胚胎低温保存已然成为人类辅助生殖中公认的技术,然而植入前胚胎在哪一个阶段实施低温冷冻储藏的效果最佳尚未明了。程序化慢速冷冻法是一项较成熟的冷冻技术,广泛的应用于辅助生殖领域,而目前玻璃化冷冻作为一种新的冷冻保存方法,与传统的程序慢速冷冻相比显得更加简单快速有效,其在复苏率、囊胚形成率、囊胚孵出率等方面都具有一定的优势。而且玻璃化冷冻技术应用的同时还减少了实验室的工作量、降低了成本,最大限度的提高了每次促排卵/取卵周期可供尝试的妊娠次数,显示出了更强的实用性。目的:本实验以小鼠4细胞、8细胞及囊胚胚胎作为实验对象,以Cryoloop为载体,分别进行两种不同的冷冻方式,探讨和对比两种冷冻方法对于不同时期的小鼠胚胎冷冻效果。方法:1昆明小鼠常规促排卵,体外受精,分别于HCG后48~50小时、60~62小时和85~96小时取4细胞、8细胞和3至4期囊胚进行程序化和玻璃化冷冻。2玻璃化冷冻与复苏:胚胎首先用预平衡液7.5%(v/v)EG、7.5%(v/v)DMSO平衡2分钟;然后转入15%(v/v)EG、15%(v/v)DMSO、0.65M sucrose的玻璃化冷冻液中,时间控制在30秒内。胚胎复苏采用0.33M、0.2M、0M sucrose复苏液,梯度稀释逐步洗脱冷冻保护剂,平衡时间分别为2min、3min和5min。3程序化冷冻与复苏:胚胎在冷冻液中处理后装入麦管,置入冷冻仪,起始温度20℃,以-2℃/min的速度降至-7℃,在-7℃保持5分钟,人工植冰,保持10分钟。以-0.3℃/min的速度降至-35℃,以-50℃/min的速度降至-150℃,从程序降温仪中取出麦管放入液氮中,在液氮内将麦管转入麦管盒中,放入胚胎保存液氮。结果:1.四细胞组程序化冷冻了104枚胚胎,解冻后存活97,存活率93.2%(97/104),继续培养到72小时后,囊胚形成率为84.5%(82/97),囊胚孵出率65.9%(54/82)。玻璃化冷冻了118枚胚胎,解冻后存活109枚,存活率92.3%(109/118),胚胎继续培养到72小时后,囊胚形成率为84.5(82/97),囊胚孵出率65.9%(54/82)。两组4细胞胚胎在存活率,囊胚形成率,囊胚孵出率的差别没有统计学意义(P>0.05)2.八细胞组程序化冷冻了110枚胚胎解冻后存活90枚,存活率81.8%,培养至72小时后,囊胚形成率为84.4%(76/90),囊胚孵出率为76.3%(58/76)。玻璃化冷冻了112枚胚胎,解冻后存活102枚,存活率91.1%,胚胎培养到72小时后,囊胚形成率为93.2%(97/112),囊胚孵出率为88.7%(86/97)。两组8细胞胚胎在存活率,囊胚形成率,囊胚孵出率的差别有统计学意义囊胚组程序化冷冻了101枚胚胎,解冻后存活83枚,存活率82.2%(83/101),冻融后囊胚孵出率为61.4%(51/83)。玻璃化冷冻了92枚胚胎,解冻后存活85枚,存活率92.4%。冻融后囊胚孵出率为82.4%(70/85)。两组囊胚分别进行玻璃化冷冻与程序化冷冻并解冻后在存活率,囊胚孵出率的差别有统计学意义结论:玻璃化冷冻技术比程序化冷冻技术在冷冻8细胞和囊胚胚胎方面更有优势,更具有实用性。