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甘草为我国传统中药,主要功效成分包括甘草酸、甘草次酸、黄酮类和多糖类化合物。目前在甘草开发实践中,大多以提取甘草酸为主,而将包括光甘草定在内的黄酮等成分随药渣弃去,造成了资源的极大浪费。为提高甘草利用率,拓展甘草产业链,本文对光果甘草中光甘草定、甘草酸两种重要活性成分的同时提取及分离工艺进行了研究。首先对光甘草定和甘草酸的同时提取工艺进行了研究。选用氨醇溶液提取光甘草定和甘草酸,通过单因素和正交实验确定了最佳提取条件:含0.6%氨水的60%乙醇溶液作提取剂,料液比1:20(w/v),80oC提取2h,最佳提取条件下光甘草定的得率为0.238%,甘草酸的得率为5.08%,提取产物中光甘草定的含量为6.30mg/g,甘草酸的含量为0.134g/g;初步探索了超声波辅助提取法的提取条件为:超声功率150W、提取时间75min、提取温度50oC、料液比1:15(w/v),在此条件下光甘草定得率为0.249%,甘草酸的得率为5.42%,提取产物中光甘草定的含量为8.54mg/g,甘草酸的含量为0.19g/g。其次研究了光甘草定和甘草酸的萃取分离工艺,选择乙酸乙酯为萃取剂,将提取液浓缩至原体积的1/4,加入等体积的乙酸乙酯萃取四次,光甘草定的含量达到40.60mg/g,萃取率为92.0%,萃余物中甘草酸保留率为94.9%,光甘草定与甘草酸达到基本分离。最后进行两种主要目的产物的进一步纯化:选择聚酰胺(60-80目)层析柱(20mm×300mm)纯化光甘草定,上样浓度为25mg/mL,上样流速为2mL/min,40%乙醇洗脱液除杂后收集50%乙醇洗脱部分减压浓缩至浓膏状,最后经冷冻干燥得砖红色粉末。通过LC-MS/MS分析鉴定,光甘草定的纯度为53.4%,高于市面商用产品,与粗提物相比纯化倍数达到近85倍;选择酸沉法精制甘草酸,使用浓盐酸调萃余液pH为2,0-4 oC低温酸沉,离心取甘草酸沉淀95%乙醇溶提,提取液加NH3·H2O调pH为7.5,离心取甘草酸三铵盐沉淀经4倍冰醋酸热溶后,静置冷却结晶得甘草酸单铵盐。最终甘草酸单铵盐纯度达到85.7%,总纯化回收率为71.2%。