论文部分内容阅读
目的:本研究运用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)、原位杂交法、Western印迹法及免疫组织化学(IHC)技术,检测早孕小鼠不同时间段子宫内膜mTOR基因表达变化,有助于从分子水平探讨mTOR在胚胎正常着床过程中的分子调控机制,为了解人类正常生殖过程机制和生殖方面疾病的诊断、治疗奠定基础。方法:1.建立NIH小鼠妊娠动物模型,随机将孕鼠分为5组作为实验组,未孕小鼠作为对照组,另设一假孕组,分离未孕和孕d3、d4、d5、d6、d7、假孕小鼠的子宫内膜组织,分别于-80℃冻存备用。2.用FQ-PCR和原位杂交法定量、定位检测mTOR在早孕小鼠不同时间段子宫内膜组织中mRNA的表达水平。3.用Western印迹法和IHC技术半定量、定位检测mTOR在早孕小鼠不同时间段子宫内膜组织中蛋白的表达水平。结果:1. FQ-PCR分析表明,妊娠子宫内膜组织mTOR mRNA的表达较未妊娠的子宫内膜组织显著增加(P<0.05);妊娠d3时mTOR mRNA表达增强,d4、d5表达到高峰,d6、d7表达迅速下降;且着床窗期(d4,d5)表达与其他妊娠各组比较差异有统计学意义(P<0.05);假孕组表达稍高于未孕组,但差异不显著。2. Western印迹法分析显示,mTOR的蛋白质表达变化趋势与FQ-PCR结果基本一致。3.原位杂交和IHC分析显示mTOR mRNA和蛋白质表达主要在子宫内膜基质细胞,与上皮细胞各组比较差异有统计学意义(P<0.05);其表达变化趋势与FQ-PCR和Western印迹法结果一致。结论:1.本研究结果显示早孕小鼠子宫内膜组织中mTOR基因表达较非妊娠的子宫内膜组织明显升高,提示mTOR对于子宫内膜组织细胞的生长、增殖和分化具有重要意义。2. mTOR表达量从着床前期至着床窗期逐渐增高,且着床窗期d4、d5达高峰,提示其作用是以mTOR为中心调控点,增强促进蛋白质合成、能量释放的信号通路的活性,为促进子宫内膜细胞快速生长、增殖和分化提供能量和物质支持。3.在胚胎着床后,d6、d7这一时期mTOR的表达与着床窗期相比迅速降低,提示mTOR的下调使着床后的子宫内膜细胞生长和增殖减缓,促进细胞凋亡,有助于通过子宫内膜容受状态的改变来适应胚胎着床。4. mTOR表达主要集中在早孕小鼠不同时间段的子宫内膜基质细胞,提示mTOR与早期妊娠子宫内膜基质细胞的生长、增殖、分化和凋亡密切相关。5.同时,研究发现假孕组mTOR的表达量稍高与未孕组,推测在胚泡着床过程中mTOR可能受雌孕激素调节但其作用有限。