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目的:探讨白介素(Interleukin,IL)-35对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的内皮功能障碍(Endothelial dysfunction,ED)中的作用及其机制。方法:细胞部分:1、将状态良好的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),传代后培养24h,分为5组,分别为空白对照组、LPS组、LPS+IL-35(1ng/ml)组、LPS+IL-35(10ng/ml)组、LPS+IL-35(100ng/ml)组,加用LPS处理24h后,再予三种不同浓度的人重组蛋白IL-35处理12h,DMEM培养基作为对照。2、流式细胞学分析细胞凋亡水平收集经过不同处理后的HUVECs,将细胞密度调节至105-106个细胞/ml,离心弃上清液,加入5ul的7-AAD处理15min,上机前5min再加入5ul的PI,最后,使用流式细胞学技术检测各组细胞凋亡水平。3、人炎症因子蛋白芯片分析各组细胞中炎症因子水平的变化。4、RT-q PCR检测细胞间黏附分子(Intercellular cell adhesion molecule,ICAM)-1、血管内皮细胞黏附分子(Vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、IL-6、IL-8m RNA水平。5、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)检测STAT1和STAT4的结合率。6、Western Blot6.1检测VCAM-1、ICAM-1、IL-6、IL-8、STAT1和STAT4蛋白表达水平;6.2使用Fludarabine(STAT1抑制剂)处理HUVECs,检测VCAM-1、ICAM-1、IL-6、IL-8的蛋白水平;6.3 si RNA干扰STAT4表达,检测VCAM-1、ICAM-1、IL-6、IL-8的蛋白水平。动物部分:1、选取周龄为14周,雄性C57BL/6小鼠共80只,适应性喂养2周后称重,按体重分层随机分为4组,分别为野生组(wildtype groups,WT组)、LPS组(LPS groups,LPS组)、LPS+空载质粒组(LPS+empty vector plasmid groups,LPS+Vector组)、LPS+IL-35质粒组(LPS+p IL-35 groups,LPS+p IL-35组)。2、给LPS组、LPS+Vector组、LPS+p IL-35组经腹腔注射LPS(20ug/g)处理24h后,再经尾静脉给LPS+Vector组注射空白质粒,LPS+p IL-35组注射IL-35质粒,余组以等量PBS作为对照,处理7天。3、ELISA检测各组小鼠血清中IL-6和IL-8浓度。4、免疫组化检测主动脉内皮黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达水平。5、WB检测主动脉VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8蛋白的表达。结果:1、LPS组vs对照组,LPS组细胞凋亡水平显著上升(P<0.05);LPS+IL-35组vs LPS组,LPS+IL-35组细胞凋亡降低(P<0.05),且与IL-35浓度呈负相关。2、RT-q PCR(1)细胞ICAM-1、VCAM-1、IL-6和IL-8m RNA:LPS组vs control组,LPS组表达量显著升高(P<0.05);LPS+IL-35组vs LPS组,LPS+IL-35组显著降低(P<0.05),且与IL-35浓度呈负相关;(2)细胞STAT4m RNA:NC组vs control组,两组无显著差异(P>0.05),STAT4-si RNA组vs control组,STAT4-si RNA组表达显著被抑制(P<0.05),其中以si RNA-593的抑制效果最明显。3、Western Blot(1)细胞部分:a、ICAM-1、VCAM-1、IL-6和IL-8的表达:LPS组vs对照组,LPS组的表达水平明显上升(P<0.05);LPS+IL-35组vs LPS组,LPS+IL-35组有所下降(P<0.05),且与IL-35浓度呈负相关;b、STAT1和STAT4的表达:LPS组vs control组,两组无明显差异(P>0.05);LPS组vs LPS+IL-35组,LPS+IL-35组STAT1和STAT4的磷酸化水平显著上升(P<0.05),且与IL-35的处理浓度呈正相关。(2)动物部分:a、ICAM-1、VCAM-1、IL-6和IL-8的表达:LPS组vs WT组,LPS组蛋白表达水平明显上升(P<0.05);LPS组vs LPS+Vector组,两组无明显差异(P>0.05);LPS组vs LPS+p IL-35组,LPS+p IL-35组显著降低(P<0.05);b、IL-35的表达:LPS组vs WT组,LPS组有所上升(P<0.05);LPS组vs LPS+Vector组,两组无明显差异(P>0.05);LPS组vs LPS+p IL-35组,LPS+p IL-35组显著上升(P<0.05)。4、ELISA检测血清IL-6和IL-8浓度:LPS组vs WT组,LPS组小鼠血清炎症因子IL-6和IL-8的水平显著上升;LPS组vs LPS+Vector组,两组无明显差异(P>0.05);LPS组vs LPS+p IL-35组,LPS+p IL-35组显著降低(P<0.05)。5、免疫组织化学染色检测小鼠主动脉ICAM-1和VCAM-1阳性表达量,LPS组vs WT组,LPS组表达量明显上升;LPS组vs LPS+Vector组,两组无明显差异(P>0.05);LPS组vs LPS+p IL-35组,LPS+p IL-35组显著降低(P<0.05)。6、免疫共沉淀检测STAT1和STAT4之间的相互作用:LPS组vs对照组,两组之间无明显差异(P>0.05);LPS+IL-35组vs对照组,LPS+IL-35组STAT1和STAT4之间的相互作用增强(P<0.05),且与IL-35浓度呈正相关。结论:1、LPS能诱导黏附ICAM-1、VCAM-1和炎症因子IL-6、IL-8的表达,导致内皮功能障碍;IL-35能抑制LPS诱导的这种作用,改善内皮功能障碍;2、IL-35通过激活STAT1和STAT4信号传导改善内皮功能障碍;3、使用STAT1抑制剂,STAT4-si RNA593干扰片段分别处理HUVECs,可逆转IL-35引起的黏附分子及炎症因子相关蛋白水平的变化;4、IL-35促进了STAT1和STAT4之间的相互作用。