炎症反应在许多中枢神经退行性疾病的发病机理中起着重要的作用,其中包括脑缺血、阿尔茨海默病、脑肿瘤以及帕金森综合症等[1,2]。炎症反应过程中,白细胞可通过渗出和趋化作用跨过血脑屏障(BBB)并进一步到达脑内炎症部位。在脑卒中的早期白细胞不仅可以跨越BBB,且能进一步浸润缺血脑区域,持续到卒中的中后期。利用白细胞这种特性,可以构建一个理想的二级靶向递药系统。本课题选取以RGD三肽为活性中心的环状cRGD肽为靶头,RGD肽可以与白细胞表面的整合素受体发生特异性结合,将其与活泼的功能磷脂DSPE-PEG-NHS偶联,并制备脑靶向脂质体,通过与白细胞表面受体结合介导脂质体跨过BBB,进一步利用白细胞可持续进入脑内病灶部位的特性,构建可对脑内病灶部位递药的二级脑靶向递药系统。通过建立脑缺血/再灌注(I/R)动物模型对靶向脂质体与白细胞的结合机理、体内脑靶向效率、二级靶向效果进行评价和研究,同时以依达拉奉和三叶因子作为模型药,建立大鼠应激和慢性不可预知的温和刺激模型,对两种模型药的药效进行研究和评价,旨在通过脑靶向递药系统提高模型药对抑郁症的治疗效果。相关研究内容及结果如下:通过 MALDI-TOF/TPF 质谱仪对 cRGD 靶头与功能磷脂DSPE-PEG-NHS偶联的产物进行表征,计算产率为72%,成功合成靶向功能磷脂cRGD-PEG-DSPE。采用薄膜分散法制备cRGD空白脂质体,测得其粒径为117.5nm,Zeta电位为-20.8mV,透射电镜观察脂质体形态为圆形或类圆形,大小均一。建立了三叶因子体外UPLC分析方法,及包封率测定方法。以包封率、粒径为指标,对TFF3-L制备工艺及处方进行了考察。最终以主动载药法制备脂质体TFF3-L和TFF3-cRGD-L,其粒径分别为129.6nm和127.8nm,包封率为 45.23%和 44.47%,Zeta电位为-36.6mV和-37.8mV,制剂稳定性良好,体外释放完全,透射电镜观察两种脂质体形态为圆形或类圆形,大小均一。偶联cRGD对脂质体理化性质无显著影响。以密度梯度离心方法,分别提取了大鼠外周全血中的单核细胞和中性粒细胞。以液闪计数仪和流式细胞仪定量的考察了白细胞与非靶向和靶向制剂的亲和能力。结果表明白细胞对靶向制剂亲和能力显著强于非靶向制剂,且单核细胞与靶向制剂有着更强的亲和力,因此证明了靶向脂质体主要通过与白细胞表面受体结合介导跨过BBB。建立裸鼠脑部急性炎症模型,以小动物活体成像仪定性考察了非靶向制剂和两种靶向制剂对造模裸鼠的脑靶向性。结果表明非靶向制剂靶向性差,很快被代谢,两种靶向制剂均有较强的脑靶向性。采用UPLC考察了脂质体被细胞摄取后的释放情况和药物在细胞内的稳定性,发现脂质体在体内白细胞中较稳定,不易释放,但随白细胞跨过BBB后开始释放,且释放较完全。建立了裸鼠脑缺血/再灌注损伤模型(I/R),将载DiR的PL和cRGD-L静脉给予模型动物,小动物活体成像研究表明cRGD-L具有明显的脑靶向性,其脑内荧光强度显著高于PL组;进一步通过脑切片TTC染色与荧光成像的叠加证实cRGD-L主要聚集在脑内的缺血部位,且cRGD-L在缺血脑半球富集的时间更长,说明本课题设计的主动靶向脂质体不仅具有明显的脑靶向性,且具有可定位于脑内病灶部位给药的二级靶向特性。通过将标记细胞质的THP-1和包载荧光素的脂质体注射到I/R大鼠体内,取出脑组织进行冷冻切片,免疫荧光,评价靶向效果,结果表明靶向脂质体具有较强的靶向性,能够到达脑内缺血部位的血管外,说明已经跟随白细胞跨过BBB。建立大鼠强迫游泳动物应激模型、慢性不可预知的温和性应激模型(CMS)、大鼠嗅球切除模型等模拟人抑郁症的动物模型,给大鼠注射PBS溶液、药物溶液、普通脂质体和靶向脂质体。包载TFF3和ER的两种靶向脂质体与对照组比较,显著性减少大鼠不动时间、增加糖水的消耗量、减少OB大鼠的运动量、缩短NSF大鼠的latency时间、增加c-fos蛋白的表达量、减少LPS诱导产生的IL-1β和IL-6。说明两种脂质体均可增强治疗抑郁症的效果,且cRGD效果更明显,证明靶向制剂有良好的靶向性。以上结果综合表明,本文构建的脑靶向递药系统具有明显的脑靶向性,且可以进一步富集在脑内的病灶部位,实现脑内二级靶向递药;同时该递药系统通过对脑内病灶部位的定位递药提高了 ER和TFF3对抑郁症的治疗效果。因此,本文设计制备的脑靶向递药系统成功地实现了向脑内病灶部位的靶向递药。