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转基因植物安全性问题一直是各界关注的问题,本研究利用分子生物学技术优化改造传统的植物表达载体,以获得无选择标记基因、无目的基因和无目的蛋白的转基因产品,从而减轻转基因植物带来的安全性问题。
利用PCR方法扩增玉米乙酰苯胺类化合物诱导启动子(In5-2启动子),并与GUS基因相连构建植物表达载体,转化烟草获得转基因烟草植株。在不同诱导时间和不同佐剂浓度条件下,对转基因烟草的GUS活性进行分析。结果表明,诱导剂的存在与GUS基因的表达呈正相关,且随着诱导时间的延长和佐剂浓度的增加,GUS活性均呈增长的趋势。利用PCR技术获得6个不同长度的玉米In5-2启动子5’端缺失片段,分别克隆到植物表达载体p1301中构建一系列植物表达载体,转化烟草获得转基因植株。GUS活性定量检测结果显示,玉米In5-2启动子的核心功能区可能位于ATG上游-1520至-1431bp之间。利用DNAMAN软件分析,在-1108至-1079bp和-891至-864bp之间存在着两个茎环结构,推测茎环结合蛋白位点可能位于-1079至-897bp之间,且ATG上游-388至-86bp之间可能存在乙酰苯胺类化合物诱导元件。
构建诱导型Cre/lox基因删除系统,并在转基因烟草中进行验证。
设计了一个“3-free”系统,用于生产无选择标记基因、无目的基因及其蛋白的转基因植物产品。
利用PCR方法克隆了苏云金芽孢杆菌毒蛋白水解酶基因(nprA),并根据植物密码子偏好性对其进行改造,进行全基因人工合成,命名为mnprA基因。分别将两个基因连入植物表达载体p1301构建植物表达载体,并转化Cry1AC转基因烟草,希望nprA(或mnprA)基因的表达产物在转基因烟草中能将Cry1Ac蛋白水解。然而,我们没有能够得到突变植株,说明nprA基因可能是一个非专一性水解酶基因。