鲍鱼内脏蛋白质酶解制备降血压多肽的研究

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鲍鱼内脏中的蛋白质含量很高,占鲍鱼内脏(干基含量)的72%,含有各种人类必须的必需氨基酸和非必需氨基酸,比如:丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸等芳香族氨基酸和疏水性氨基酸含量都很高。但是国内外对鲍鱼内脏的蛋白质的研究的报道几乎处于空白状态,目前还没有有效的方法去利用它们,将其作为天然活性肽的生物资源进行开发和利用具有非常重要的意义。本研究以鲍鱼内脏为原料,通过对其物性分析、提取、分离纯化技术条件的探讨,制备能够抑制血管紧张素转化酶(ACE)活性的鲍鱼内脏降血压多肽,为鲍鱼废弃资源的深加工和综合利用提供了理论依据,并为其进一步开发天然降血压保健品奠定了基础。本研究包括:1、鲍鱼内脏粗蛋白中指标的测定结果表明鲍鱼内脏粗蛋白中含有灰分7.53%,水分64.94%,蛋白质14.72%。2、本研究采用酶法制备ACE抑制肽,用五种不同的蛋白酶对鲍鱼内脏粗蛋白进行酶解得到水解产物,并测其水解度和对ACE的抑制率,通过比较,其中1.398中性蛋白酶的抑制率高达84.93%,水解度8.37%,粗蛋白溶液酸碱度接近中性,因此,综合考虑,1.398中性蛋白酶为最适蛋白酶。3、通过对1.398中性蛋白酶的活力测定,确定了其活力为:中性蛋白酶的活力=14万U/g。4、通过单因素考察研究对鲍鱼内脏蛋白ACE抑制肽的酶解制备条件进行初步优化,确定了1.398中性蛋白酶酶解鲍鱼内脏蛋白的最适条件:底物浓度为3%、加酶量为4500U/g、pH值为7.0、酶解温度为45℃、酶解时间为5h。5、经过分离纯化得到的3000Da以下的多肽溶液,并测定其多肽含量和对ACE抑制活性。实验结果表明:多肽含量为10.25mg/mL,对ACE的抑制活性为52.94%。6、2006年食品安全专家对食物中的镉的最高含量设定了新的国家标准,以提高和保证食品的安全,除牡蛎和扇贝类外的贝壳类海产品中的镉含量不能超过2 mg/Kg,根据实验结果表明,制备的ACE抑制肽粉末中的镉的含量为0.89 mg/Kg,符合国家标准的。7、在长期给药实验后,长期用鲍鱼内脏蛋白肽和卡托普利灌胃对原发性高血压大鼠(SHR)和京都wistar大鼠(WKY)体重影响的差异并不显著,因此鲍鱼内脏蛋白肽和卡托普利基本上不会对SHR和WKY的体重增长或减少造成影响。在一次性给药实验后,其鲍鱼内脏蛋白抑制肽和卡托普利的SHR在2到6h内保持降压活性,并且最大降幅均出现在灌胃4h后,分别为22.68mmHg和61.33 mmHg。随后血压开始回升,8h后血压数值基本上又回复到原有的水平,说明ACE抑制剂在SHR大鼠体内是具有短期降血压活性的。8、在长期给药实验中,灌胃鲍鱼内脏蛋白抑制肽的SHR血压的最大降幅到达26.40mmHg,卡托普利最大降幅为35.00 mmHg,且对WKY的血压基本上没有影响。9、在长期给药实验后,测定大鼠的血清中MDA和SOD指标表明,鲍鱼内脏蛋白肽和卡托普利灌胃对SHR和WKY大鼠有一定的伤害,但是由于伤害不显著,因此,鲍鱼内脏蛋白肽和卡托普利对大鼠的造成伤害基本忽略不计。因此,本实验制备的鲍鱼内脏蛋白肽对老鼠是没有伤害的。10、在长期给药实验后,摘取大鼠肝脏,制备肝切片,并且在光镜下观察,样品组与空白组的SHR大鼠肝切片相差无几,由此可知鲍鱼内脏蛋白降血压多肽样品对SHR大鼠的肝脏基本上无损害,而药物组的肝组织的细胞间隙明显大于其他两组,卡托普利对SHR大鼠有一定的伤害;WKY大鼠的样品组肝组织的细胞间隙大于空白组,由此可知鲍鱼内脏蛋白降血压多肽样品对WKY大鼠肝脏有一定的损害,而卡托普利对WKY大鼠的损害最大。11、长期给药后,称量大鼠体重和心脏的重量,并计算心脏重量指数并分析研究表明,自制ACE抑制肽和卡托普利不会加重心脏肥大的症状,从而也就不会加重心脏的负荷。自制ACE抑制肽对大鼠的心脏伤害作用基本上可以忽略不计。
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