基于生物质吸附剂去除明胶中内毒素的应用研究

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明胶是动物皮和骨胶原部分降解并纯化后得到的产物,因具有优异的力学特性、可降解性及良好的生物安全性,成为再生医学领域最重要的原材料之一。明胶可用于人工血浆,体内、体外可降解吸收医疗制品,包括止血材料(胶、粉、膜、块),修复、替换类组织工程材料,疫苗稳定剂,干细胞载体等核心原材料或者载体材料。但其中内毒素等成分限制了其应用。目前,开发具有高吸附量、高稳定性、具有工业化应用前景的去除明胶中内毒素的吸附剂是亟待解决的问题。本文分别以壳聚糖(Chitosan,CS)包覆硅胶颗粒和棉纤维为载体,以三乙烯四胺和聚乙烯亚胺为配基,合成了一系列功能化材料去除明胶中的内毒素,并系统研究吸附剂对明胶溶液中内毒素的吸附行为,以期得到具有低内毒素含量的生物安全性明胶。同时也建立了定量检测明胶中内毒素含量的检测方法。主要研究工作如下:1、以壳聚糖为基体,将硅胶表面均匀包裹壳聚糖,利用戊二醛将三乙烯四胺(TETA)接枝到壳聚糖表面,合成了三乙烯四胺修饰的壳聚糖/硅基系列吸附材料(TETA-x GA-CS-Si O2)。利用红外光谱、扫描电镜、热重分析和p Hpzc分别表征了吸附剂TETA-x GA-CS-Si O2的结构、形貌、热稳定性和表面电荷变化等特性。在弱酸条件下,当戊二醛的添加量为3%的条件下合成的吸附剂TETA-3%GA-CS-Si O2对内毒素有较好的吸附作用。通过零点电荷法测定吸附剂的表面电荷,说明吸附行为主要为荷正电的吸附剂与荷负电的内毒素之间的静电吸附作用。动力学和等温吸附实验结果表明吸附剂对明胶溶液中的内毒素吸附为单层吸附,受溶液扩散的影响,经过Langmuir模型计算吸附剂最大吸附量为2.12×10~5 EU/g。吸附-脱附实验结果表明,TETA-3%GA-CS-Si O2对明胶溶液中内毒素的吸附具有较好的稳定性。吸附前后明胶冻力、粘度、透过率没有明显变化,内毒素得到有效去除,脱内毒素纯化明胶无细胞毒性,具备在植入型医疗器械及可再生医学领域应用的可行性。2、以棉纤维为载体材料,在不同的碱性条件(0.5 mol/L、1.5 mol/L和2.5mol/L)下利用环氧氯丙烷将三乙烯四胺接枝到棉纤维表面,合成三种不同的中间体TETA-ECH-CTN。为了增加吸附剂表面的氨基含量,进一步用戊二醛将聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)接枝到中间体。利用红外光谱、扫描电镜、热重分析和p Hpzc分别表征了吸附剂的结构、形貌、热稳定性和表面电荷变化等特性。在弱酸条件下,当戊二醛的添加量为5%v/v的条件下合成的吸附剂对内毒素有较好的吸附作用。通过零点电荷法测定吸附剂的表面电荷,进步的酸度实验有效的说明吸附行为主要为荷正电的吸附剂与荷负电的内毒素之间的静电吸附作用。动力学和等温吸附实验结果表明吸附剂对明胶溶液中的内毒素吸附为单层化学吸附,经过Langmuir吸附模型计算最大吸附容量为1.37×10~5 EU/g。吸附-脱附实验结果表明,吸附剂对明胶溶液中内毒素的吸附具有较好的稳定性。得到的棉纤维吸附材料其吸附性能更高,机械性能更好,内毒素得到有效去除,脱内毒素纯化明胶无细胞毒性且物理化学性质没有明显的变化,具备在植入型医疗器械及可再生医学领域应用的可行性。更有利于应用于实际生产。
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