研究背景：胆囊癌(Gallbladder Cancer)是胆道系统最常见的恶性肿瘤。胆囊癌的病因及发病机制目前还未研究清楚。早期缺乏特异性临床表现,致使诊断常被延误,出现腹痛或黄疸等症状时多为中、晚期表现。此外,胆囊癌具有局部侵犯、广泛区域淋巴结转移、血管及远处转移的特性,是侵袭性最高的胆道系统肿瘤。患者多因胆管受肿瘤侵犯或出现肝十二指肠韧带淋巴结、腹腔广泛转移等情况,出现黄疸、乏力和恶病质等全身症状。绝大多数病人确诊时已属晚期,丧失了有效治疗的机会。虽然外科手术治疗仍为临床治疗首选,彻底的手术切除仍是胆囊癌唯一有可能的治愈方式,但胆囊癌手术切除远期疗效不能确定。胆囊癌对放疗、化疗均不敏感,目前临床仍缺乏令人满意的治疗方案。发现和研究新的特异性治疗方法是提高胆囊癌治疗效果的迫切要求,多种治疗方法联合应用的个体化综合治疗方案将是改善胆囊癌预后的希望所在。目前研究表明,虽然机体免疫系统可以产生抗肿瘤免疫应答,但肿瘤仍能在体内不断生长。针对这个问题,学界提出了“肿瘤微环境”的概念。肿瘤微环境是肿瘤发生生长过程中所处的内环境,由肿瘤细胞、基质细胞、免疫炎性浸润细胞、微血管、组织液及多种细胞因子等共同构成。其代谢微环境的一个重要生物学特征即组织缺氧、间质高压、免疫炎性因子浸润。这些微环境中的生长因子、细胞趋化因子及免疫炎性因子与相关受体之间相互作用,促进了肿瘤的生长、增殖、侵袭及迁移。研究肿瘤微环境的复杂机制,对临床改善肿瘤微环境、更为有效的治疗肿瘤有着重要的意义。研究发现,髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)是来源于未成熟髓系细胞不同分化阶段的异质性细胞群体,在病理条件下可以诱导免疫抑制、介导免疫耐受,促使肿瘤逃逸机体的免疫监视和攻击,促进慢性感染及肿瘤的发生发展,是一群在病理条件下产生的具有显著的负向免疫调控功能的天然免疫细胞,集中分布在外周血、脾脏、淋巴结、骨髓及肿瘤微环境等部位。MDSCs表面标记具有显著的异质性,缺乏公认的通用表型,我们在研究中采用目前应用最多的人Lin-HLA-DR-CD33+和小鼠CD11b+Gr-1+表达模式作为其表面标志。通过消除MDSCs及其趋化因子受体亚群细胞,促进不成熟的MDSCs分化为成熟的髓细胞,可以消除其对免疫系统的抑制性,将有助于肿瘤的治疗。如何有效降低MDSCs及其亚群细胞在活体中的数量和功能、减轻其对免疫细胞的抑制,将对癌症和其他疾病的临床治疗起到重要作用。研究目的：通过本课题的研究,对胆囊癌肿瘤微环境中的MDSCs及其趋化因子受体亚群细胞进行筛选及鉴定,并进一步通过调控MDSCs及亚群细胞,探讨MDSCs参与胆囊癌肿瘤微环境的免疫应答变化及相关机制,通过阻断肿瘤免疫逃逸过程以减轻肿瘤宿主机体的免疫抑制状态,更加深入地认识机体维持免疫稳定、抑制自身免疫、控制移植排斥、调控感染免疫、以及肿瘤微环境中免疫功能状态等方面的机制,从而为以诱导抗肿瘤免疫应答的免疫干预措施来防治肿瘤免疫相关疾病提供有力的理论指导与实践措施。研究方法：①通过采集人胆囊癌血样及肿瘤组织,利用免疫组化及流式细胞技术定性、定量分析肿瘤组织微环境中MDSCs。②通过人源性胆囊癌细胞系建立裸鼠荷瘤动物模型,流式细胞术筛选、鉴定、定量分析肿瘤组织微环境中MDSCs及其趋化因子受体亚群细胞。③通过建立药物干预MDSCs亚群细胞裸鼠荷瘤模型,进行了解MDSCs亚群细胞靶向调控对裸鼠胆囊癌肿瘤微环境影响的可行性研究。研究结果：①成功建立了人源性胆囊癌细胞裸鼠荷瘤动物模型及MDSCs趋化因子受体干预模型;②通过流式细胞术对人胆囊癌血样、肿瘤组织及荷瘤裸鼠的胆囊癌组织和脾脏组织进行分析,分别检测出表面标志为Lin-HLA-DR-CD33+人胆囊癌MDSCs细胞和CD11b+Gr-1+荷瘤裸鼠MDSCs细胞；③进一步通过流式细胞术分选鉴定MDSCs亚群细胞,检测出CXCR2及CX3CR1亚群细胞,未鉴定出CCR2亚群细胞；④通过干预MDSCs趋化因子受体亚群细胞后可以发现：予以干预后各干预组瘤块体积较对照组明显减小(P<0.05)；应用替吉奥(以替加氟计)后,裸鼠肿瘤组织及其脾脏组织MDSCs及其亚群比例较对照组趋势明显升高,维生素D3、塞来昔布、辛伐他汀及受体阻断剂SBSS比例较对照组趋势降低；受体阻断药物辛伐他汀对CX3CR1和SBSS对CXCR2的阻断趋势更为明显。研究结论：①在人源性胆囊癌细胞裸鼠荷瘤动物模型所建立的胆囊癌肿瘤微环境中广泛存在髓源抑制性细胞并可依据趋化因子受体不同可将胆囊癌肿瘤微环境及脾脏内的MDSCs可以分为CXCR2及CX3CR1趋化因子受体亚群细胞；②同时针对MDSCs及趋化因子受体亚群细胞进行药物干预研究,发现能够有效的改善肿瘤微环境、抑制肿瘤组织的生长,研究发现虽然替吉奥对胆囊癌细胞具有明显的杀伤效果,但与文献报道不同,其对胆囊癌组织及其脾脏组织中的MDSCs的影响微小；③应用趋化因子受体阻断剂辛伐他汀及SBSS,均能有效降低肿瘤微环境内MDSCs及相应亚群细胞的表达比例,在减少胆囊癌微环境中MDSCs聚积的同时阻断了相应趋化因子受体的表达。MDSCs抗肿瘤治疗与其他的治疗手段联合应用,或将其作为其他免疫治疗的一个辅助手段,为改善肿瘤患者的免疫状况、提高抗肿瘤免疫治疗疗效提供临床治疗新思考。