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研究背景：原发性肝癌是世界性最高发的癌症之一,早期诊断率低,术后复发率高,一经发现多为晚期,因此寻求新型有效的抗肝癌药物具有重要意义。Nucleophosmin(又称NPM、B23、numatrin或者NO38)是主要的核仁磷酸化蛋白,其结构特征包含一个氨基末端保守的寡聚化区,NPM在细胞中存在有单体和寡聚体之间的转化。研究表明,NPM的寡聚化可能是调节NPM多种功能的必要步骤。此外,许多研究表明NPM在多种肿瘤细胞和生长期细胞中的含量明显高于静止期细胞。在分化和凋亡细胞中,NPM的表达水平下调。NPM的高表达能抑制细胞凋亡。NPM与肿瘤抑制因子P53直接作用,并能降低其转录活性。因此NPM可能是一个潜在的原癌基因。Yun等的最新研究表明,NPM在肝细胞癌(HCC)中呈高表达,且显著高于非癌肝组织；NPM在HCC中的高表达与增殖细胞核抗原(PCNA)水平以及血清AFP,肝硬化等临床预后参数相关；NPM可能是潜在的HCC标记物。因此,NPM将可能成为肝癌治疗的新靶点。在自然状态下,NPM以寡聚物的形式存在。Qi等2008年于Oncogene上首次报道他们通过对NPM分子模型三维结构的研究,确定影响其寡聚物形成的药效基团,然后经计算机筛选以及相互作用而确定了一种NPM的小分子抑制剂(SMI)——NSC348884。它能特异性破坏NPM氨基末端的疏水口袋结构,从而抑制NPM寡聚物的形成,破坏其在癌细胞中的异常功能。他们的研究表明NSC348884以1.7-4.0μM的IC50在多种癌细胞系中抑制了细胞的增殖,包括前列腺癌,结肠癌,乳腺癌,肺癌,淋巴癌。因此,NSC348884将可能成为抗癌治疗的新型药物。据Qi等的报道NSC348884对多种癌细胞的增殖有抑制作用,而NSC348884对肝癌细胞的作用目前尚无报道,本实验通过免疫印迹法检测NSC348884对肝癌细胞株HepG2中NPM寡聚物的破坏作用,并用MTT法检测不同浓度药物对肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,流式细胞术检测不同浓度药物诱导HepG2细胞凋亡,而NSC348884诱导HepG2细胞凋亡的机制尚需进一步研究。第一部分NSC348884对Nucleophosmin寡聚物向单体转化的作用目的探讨NSC348884对Nucleophosmin寡聚物向单体转化的作用。方法0μM(对照组),2μM NSC348884(实验组)分别处理肝癌细胞HepG2,24小时后用western blot检测寡聚物和单体的表达强度变化。结果western blot结果显示：实验组的寡聚物被破坏,而相应单体的表达强度较对照组增高,二者差异有统计学意义。结论NSC348884能特异性破坏肝癌细胞HepG2的Nucleophomin寡聚物结构,使其转变为单体。第二部分NSC348884对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响目的探讨NSC348884对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响。方法不同浓度NSC348884处理肝癌细胞HepG2, MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡。结果MTT结果显示NSC348884能明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖,流式细胞术检测结果显示NSC348884能诱导肝癌细胞HepG2凋亡。结论NSC348884能明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖并诱导其凋亡。