枣树优良品种叶片离体再生体系构建与多倍体诱导初探

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枣(Ziziphus jujuba Mill.)是原产于我国的重要经济树种。本试验以‘骏枣’、‘灰枣’、‘冬枣’等枣树优良品种为材料,完善了不同枣树品种的组织培养关键环节,并在此基础上,探索并建立了不同枣树品种叶片不定芽再生体系,对枣树叶片离体再生不定芽发生过程进行了组织学观察;利用‘骏枣’叶片不定芽再生体系进行了秋水仙素诱导离体加倍的初步研究。主要试验结果如下:(1)‘冬枣’愈伤组织的最佳分化培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+30g/L麦芽糖+5.9 g/L Agar,分化系数最高为2.77±0.15;‘骏枣’的最适继代培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.005 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+5.9 g/L Agar;‘骏枣’的最适生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+5.9 g/L Agar,生根率为100%,平均根数可达到11.23±0.75根,平均根长为0.49±0.01 cm。(2)‘骏枣’的最适叶片离体再生培养基为WPM+1.0 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+5.9 g/L Agar;‘灰枣’的最适叶片离体再生培养基为WPM+1.0 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+5.9 g/L Agar。以‘骏枣’组培苗叶片为外植体,对叶片离体再生不定芽过程进行组织学观察。组织学研究结果表明,暗培养至第4 d时,维管束处的薄壁细胞开始分裂,到第7~14 d时,进入旺盛分裂期,21 d时,分裂暂缓,形成芽原基,在此时转至光下继续培养,可提高不定芽诱导率;同时,根据组织学研究结果可以得出,在第7~14 d进行秋水仙素诱导加倍最为适宜。(3)试验初步探究了预培养时间、秋水仙素浓度及处理时间对‘骏枣’染色体加倍的影响。试验结果表明,使用40 mg/L的秋水仙素处理48 h或72 h均可得到再生植株,但整体再生能力偏低,褐化现象较为严重,未得到多倍体植株。在此基础上,进一步探究Ag NO3在‘骏枣’离体诱导加倍试验中的抗褐化功效,试验结果显示,使用2 mg/L的Ag NO3可有效提高‘骏枣’的外植体存活率,从而获得更多的再生植株。
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