【摘 要】
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高温蛋白酶因其反应温度高、热稳定性好而在工业生产中被广泛应用。本文从来自云南腾冲热海热泉水样,分离得到一株产高温蛋白酶的菌株GSEY01.该菌株在2%酪蛋白琼脂固体培养基上能产生明显的蛋白水解圈,其水解圈直径/菌落直径比为0.6。该菌株最适生长温度为60℃,经16S rRNA基因序列分析表明,该菌株为土芽孢杆菌属（Geobacillus）的嗜热菌株。该菌株所产高温蛋白酶Pgsey可以通过超滤浓缩,
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高温蛋白酶因其反应温度高、热稳定性好而在工业生产中被广泛应用。本文从来自云南腾冲热海热泉水样,分离得到一株产高温蛋白酶的菌株GSEY01.该菌株在2%酪蛋白琼脂固体培养基上能产生明显的蛋白水解圈,其水解圈直径/菌落直径比为0.6。该菌株最适生长温度为60℃,经16S rRNA基因序列分析表明,该菌株为土芽孢杆菌属（Geobacillus）的嗜热菌株。该菌株所产高温蛋白酶Pgsey可以通过超滤浓缩,硫酸铵分级沉淀和强阴离子交换层析获得纯酶。此高温蛋白酶分子量约为42 kDa,最适催化温度为80℃,最适催化pH值为7.5,Mg2+能增强该酶活力,Fe3+、Cd2+、Ni2+对其活性则有抑制作用。PMSF对该酶影响较小,EDTA和SDS则对其有强烈的抑制作用,蛋白酶在98℃下处理30min仍然有17%左右的剩余活性,此高温蛋白酶和其他土芽孢杆菌所产蛋白酶有较大差异,可以应用于相关的高温催化环境。解旋酶是马达蛋白质,使用NTP水解产生的自由能催化双链核酸分子的解链。解旋酶几乎参与所有的核苷酸代谢过程,如复制、重组、修复、转录、翻译、剪接、mRNA编辑、染色体重建、转运和降解等。本文根据高温菌解旋酶的保守序列设计引物,对高温菌Thermus TC16菌株的解旋酶基因进行扩增、测序及序列分析。Thermus TC16菌株的解旋酶含444个氨基酸,与Thermus属菌株的解旋酶基因相似性约为84%,对其进行保守结构域分析表明Thermus TC16菌株的解旋酶Htc16属于解旋酶DnaB超家族,有五个motif,其中包括walker A motif和Walker B motif,同源建模分析表明其与模型2q6aA相似。将该解旋酶基因连接到表达载体pET-28a中,转化BL21（DE3）感受态细胞,得到表达菌株BL21/pET28a-htc16,此解旋酶重组蛋白在37℃获得表达,重组蛋白分子量约53 kDa.1mM IPTG 37℃诱导8h,表达量达到最大,为包涵体表达。
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