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巨噬细胞是机体免疫系统的重要细胞成份，具有吞噬、杀伤、递呈抗原、分泌生物活性物质、调控局部组织微环境以及抑制肿瘤等多种功能，构成了机体非特异防御的主要基础。本研究室前期研究发现苜草素对肉仔鸡的免疫机能具有增强作用，对小鼠外周淋巴细胞的增殖具有促进作用。为了进一步研究揭示苜草素对动物免疫系统的作用效果及其机理，以BABL/c小鼠为实验动物，通过活体上观察、细胞培养、细胞因子及其mRNA表达量检测、信号转导等多层次和系统的试验分析，研究了苜草素对巨噬细胞功能的影响及其机理。试验一苜草素对BABL／c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性、代谢活性的影响为了检测苜草素在体内对小鼠巨噬细胞功能的影响，本试验以50只雄件，6-8周龄Balb/c小鼠，随机分为四组：空白组，300mg／kg·d、500mg／kg·d、1000mg／kg·d组，每组10只。每天灌胃给药一次，空白对照组用等体积的0.9％生理盐水代替，连续14d。于第14d处死，制备腹腔巨噬细胞，测定苜草素对其吞噬活性、代谢活性的影响。结果发现，随着苜草素剂量的增加，巨噬细胞的吞噬活性逐渐增加，并在1000mg／kg·d时达到显著性差异(P＜0.05)。但是对巨噬细胞的代谢活性没有显著影响。试验二苜草素对巨噬细胞RAW26.7吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌量的影响为确定苜草素对巨噬细胞吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌量的影响，以不同浓度(0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg／ml)的苜草素处理RAW26.7巨噬细胞，结果发现，随着苜草素浓度的增加RAW264.7的吞噬活性也逐渐增加趋势，在0.4mg／ml时开始呈现显著性差异(P＜0.05)，在1mg／ml时巨噬细胞的吞噬能力达到最高达到最大值，这与活体观察结果相一致。对于NO的分泌能力，随着苜草素浓度的增加，其逐渐降低了LPS诱导的NO的分泌。与LPS处理组相比，在0.6mg／ml的剂量下开始成显著性差异(P＜0.05)。在1mg／ml下达到最大抑制效果。而且苜草素逐渐抑制了LPS诱导的IL-6产生。与LPS处理组相比，从0.2mg／ml时开始就已经出现显著性差异(P＜0.01)，并逐渐降低，在1mg/L时抑制作用达到最大程度。苜草素增加了RAW26.7对TNF-α的分泌量，并随着苜草素剂量的增加，TNF-α的分泌量逐渐升高，与空白组相比，从0.6mg／ml开始就已经出现显著性差异(P＜0.01)，在1mg／ml时升高到到最大程度。试验三苜草素对巨噬细胞RAW26.7 iNOS、IL-6、TNF-αmRNA表达量的影响为进一步确定苜草素对RAW264.7细胞中NO、TNF-α和IL-6的mRNA表达量是否产生影响，首先确定了iNOS、TNF-α、IL-6的最佳RT-PCR条件，又以不同浓度的苜草素(0.2，0.4，0.8，1.0mg／ml)和脂多糖(10μg／ml)处理RAW264.7细胞，然后检测细胞因子TNF-α、IL-1、及IL-6 mRNA的表达水平变化。结果发现随着苜草素剂量的增加，iNOS和IL-6 mRNA的表达量逐渐下降，这与前期检测NO利IL-6的分泌减少相吻合。因此可以推测，苜草素降低NO利IL-6分泌的原因是是抑制了iNOS和IL-6 mRNA的表达。苜草素对TNF-αmRNA的表达的影响与其相反，其显著增加了巨噬细胞TNF-αmRNA的表达量，这与前期检测TNF-α的分泌结果相吻合。综上所述，苜草素通过调节巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α基因的转录，进而调节了NO、IL-6、TNF-α的分泌量。试验四苜草素通过p38MAPK调控TNF-α的表达和分泌为了研究p38MAPK是否在苜草素对TNF-αmRNA的调控中起到作用，首先确定了苜草素刺激巨噬细胞的最佳浓度和最佳时间，然后以0.01、0.1、1、5、10、20μg／ml的p38MAPK抑制剂SB203580预处理巨噬细胞以抑制p38MAPK，最后在最适的苜草素浓度和最适时间下再处理巨噬细胞，然后检测SB203580对苜草素处理的巨噬细胞TNF-α表达和分泌的影响。我们发现SB203580抑制了苜草素诱导的TNF-α分泌量和mRNA表达量的上升。根据此结果可以确定，苜草素是通过p38MAPK来调控TNF-α基因的表达进而调节TNF-α分泌的。