论文部分内容阅读
第一部分Skp2在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用目的:蜕膜细胞的增殖与凋亡的动态平衡是维持蜕膜化正常进行的关键。Skp2作为促进细胞从G1期向S期转换的重要调控因子,它可以使cyclin、CKI等靶蛋白泛素化,从而调节细胞周期,进而参与细胞增殖和凋亡的调控。研究发现,Skp2在多种癌症的发生过程中发挥重要作用,但其在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用尚不清楚。本研究拟在观察Skp2在围着床期小鼠子宫内膜表达规律的基础上,初步探讨Skp2在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用。方法:1.构建早孕小鼠正常妊娠模型与假孕模型并用免疫组化与Western blot检测Skp2的表达。2.构建早孕小鼠体内人工诱导蜕膜化模型并用免疫组化与Western blot检测蜕膜化诱导前后Skp2的表达。3.构建体外原代小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导模型并用Western blot检测细胞诱导前后Skp2的表达。4.构建Skp2过表达的原代小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导模型,Western blot检测蜕膜标志物BMP2、MMP2、HOXA10和Skp2在小鼠子宫内膜基质细胞中的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:1.Western blot和免疫组化结果显示,随着妊娠天数的递增,Skp2在正常妊娠第5、6、7天(D5、D6、D7)的小鼠子宫内膜组织的蛋白表达显著低于正常妊娠第1天(D1);Skp2在正常妊娠D5、D6、D7子宫内膜着床点组织的蛋白表达明显低于D5、D6、D7的子宫内膜着床旁组织。2.Western blot和免疫组化结果显示,Skp2在假孕第4天(PD4)小鼠子宫内膜组织的蛋白表达显著高于PD6、PD7。3.Western blot和免疫组化结果显示,蜕膜化诱导侧子宫内膜组织Skp2蛋白表达明显低于未诱导侧子宫内膜组织。4.Western blot结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导后Skp2蛋白表达明显低于未诱导组,上调Skp2表达后,蜕膜标志物BMP2、MMP2、HOXA10表达紊乱。流式细胞术检测结果显示,上调Skp2表达后,细胞凋亡显著增加。结论:该研究初步揭示了Skp2参与调节早孕小鼠子宫内膜蜕膜化,其具体机制有待进一步研究。第二部分TFEB在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用目的:TFEB可通过调控自噬-溶酶体途径在诸多生理病理过程中影响细胞凋亡。在蜕膜化进程中,蜕膜细胞的增殖与退化同时并存,二者在动态平衡中协调蜕膜细胞的数量和滋养细胞的侵蚀,维持蜕膜化的正常进行。课题组前期发现FOXO3a可能通过细胞凋亡途径参与妊娠早期子宫内膜蜕膜化。作为可被FOXO3a负调控的下游分子TFEB是否同样参与妊娠早期子宫内膜蜕膜化尚不清楚。因此,本研究旨在分析TFEB在围着床期小鼠子宫内膜中的表达规律,初步探讨TFEB在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用。方法:1.构建早孕小鼠正常妊娠模型与假孕模型并用q PCR与Western blot检测TFEB的表达。2.构建早孕小鼠体内人工诱导蜕膜化模型并用q PCR与Western blot检测TFEB的表达。3.构建体外原代小鼠子宫内膜基质细胞人工诱导蜕膜化模型并用q PCR与Western blot检测TFEB的表达。结果:1.Western blot和Real-time PCR结果显示,随着孕期天数的增加,TFEB在D4、D5、D6的表达逐渐减少;Western blot、Real-time PCR和免疫组化的结果显示,TFEB在D5子宫内膜着床点组织的表达明显低于D5子宫内膜着床旁组织。2.Western blot和Real-time PCR结果显示,小鼠体内蜕膜化诱导侧子宫内膜组织TFEB表达明显低于未诱导侧子宫内膜组织。3.Western blot和Real-time PCR结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞体外蜕膜化诱导后TFEB表达明显低于未诱导组。结论:本研究初步揭示TFEB可能与妊娠早期小鼠子宫内膜蜕膜化有关,但其具体调节作用有待后续进一步深入探讨。