拟南芥AtCBL9蛋白的原核表达纯化及晶体生长研究

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拟南芥AtCBL9蛋白是CBL蛋白家族中的一员,在CBL-CIPK信号调控体系中起到重要作用。AtCBL9参与ABA依赖的低K+胁迫反应的调控,与CIPK23激酶形成的复合物介导ABA依赖的信号传导,并在脱水条件下调控气孔的关闭。AtCBL9蛋白晶体结构的解析已成为其功能阐明过程中的关键问题,目前还没有AtCBL9三级结构的相关报道,本研究将拟南芥AtCBL9基因构建入原核表达载体pET-22b(+),在大肠杆菌中得到大量表达,用亲和层析和分子筛排阻层析两种方法对表达蛋白进行纯化。SDS-PAGE和动态光散射分析结果显示,AtCBL9蛋白在体外主要以单体和二体形式存在,单体和二体为同一蛋白,并具有较高的纯度。从单体蛋白中筛选出了微晶,为AtCBL9晶体生长优化及其最终结果解析和功能阐明打下了基础。
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