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目的:食管癌(esophageal cancer,EC)是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,在全球有较高死亡率。EC的发生有明显地区差异,中国食管癌的发病率明显高于其他国家。其中食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是EC的主要病理类型。尽管近年来,ESCC在多学科综合治疗中取得了一定的效果,但5年生存率仍然很低。贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)是我国北方地区较为常见的恶性肿瘤之一。GCA起病隐匿且其发病率总体呈上升趋势,有症状来就诊时患者多数已到中晚期。然而迄今为止,食管鳞癌和贲门腺癌的发病机制尚未完全明确。因此,寻找ESCC及GCA发生的早期生物标志物,探索其发病机制对于临床中的预防及治疗显得尤为重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNAs)是指长度在200~100000 nt之间,具有调控基因表达作用的非编码RNA。近年来研究者通过基因芯片技术筛选出的lnc RNAs在ESCC及GCA发病中的作用机制仍不清楚,lnc RNAs与ESCC、GCA相关性的研究报道较少。因此,本研究旨在通过检测lnc RNA LOC100130476在食管癌细胞系、食管鳞癌及贲门腺癌组织中的表达情况及甲基化状态,分析该lnc RNA表达与甲基化状态的相关性,并结合临床资料探讨其与患者年龄、性别、淋巴结转移、组织分化程度、TNM分期之间的关系,为lnc RNA LOC100130476在ESCC及GCA发生和发展中的作用提供实验依据。方法:1应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法分别检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine,5-Aza-d C)处理前后的食管癌细胞系(TE1、TE13、T.Tn、Eca109)中、72例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中和76例贲门腺癌及相应癌旁正常组织中LOC100130476的表达情况。2应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerasechain reaction,MSP)法分别检测应用5-Aza-d C处理前后的食管癌细胞系、72例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中和76例贲门腺癌及相应癌旁正常组织中LOC100130476的甲基化状态。3运用统计学软件SPSS13.0对数据进行统计学分析。结果:1食管癌细胞系中lnc RNA LOC100130476的表达情况及甲基化状态1食管癌细胞系中lnc RNA LOC100130476的表达情况及甲基化状态1.1 5-Aza-d C处理前后食管癌细胞系中lnc RNA LOC100130476的表达未经5-Aza-dC处理的食管癌TE1、TE13和T.Tn细胞中LOC100130476的表达均为阴性,在Eca109细胞中为弱阳性表达;用5-Aza-d C处理后,TE1、TE13和T.Tn细胞中LOC100130476均转变为阳性表达,而在Eca109细胞中较未用5-Aza-d C处理的细胞表达上调。1.2 5-Aza-d C处理前后的食管癌细胞系中lnc RNA LOC100130476的甲基化状态TE1、TE13、T.Tn和Eca109细胞中,在5-Aza-d C未处理前LOC100130476均表现为高甲基化的状态,应用5-Aza-d C处理后,Eca109细胞系中LOC100130476甲基化程度明显降低,其余3种细胞中的LOC100130476则均表现为非甲基化状态。2食管鳞癌组织中lnc RNA LOC100130476的表达水平、甲基化状态以及与临床病理学资料之间的关系2.1食管鳞癌组织中lnc RNA LOC100130476的表达LOC100130476在食管鳞癌组织中的表达显著低于相应癌旁正常组织(0.49±0.09 vs 0.56±0.08),两者差异具有统计学意义(t=-5.893,P<0.05)。在食管鳞癌患者中,LOC100130476的表达与组织分化程度和TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及淋巴结转移无关(P>0.05)。2.2食管鳞癌组织中lnc RNA LOC100130476的甲基化状态食管鳞癌组织中LOC100130476的第一外显子区甲基化率显著高于癌旁正常组织[69.4%(50/72)vs 26.4%(19/72)],两者差异具有统计学意义(χ2=26.741,P<0.05),并与组织分化程度和TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及淋巴结转移无关(P>0.05)。发生LOC100130476甲基化的食管鳞癌组织中LOC100130476的表达显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织(0.47±0.08 vs 0.55±0.08),两者差异具有统计学意义(t=-4.099,P<0.05)。3贲门腺癌组织中lnc RNA LOC100130476的表达水平、甲基化状态以及与临床病理学资料之间的关系3.1贲门腺癌组织中lnc RNA LOC100130476的表达LOC100130476在贲门腺癌组织中的表达显著低于相应癌旁正常组织(0.61±0.22 vs 0.79±0.23),两者差异具有统计学意义(t=-5.387,P<0.05)。在贲门腺癌患者中,LOC100130476的表达与组织分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及TNM分期无关(P>0.05)。3.2贲门腺癌组织中lnc RNA LOC100130476的甲基化状态贲门腺癌组织中LOC100130476的第一外显子区甲基化率显著高于癌旁正常组织[64.5%(49/76)vs 23.7%(18/76)],两者差异具有统计学意义(χ2=25.649,P<0.05),并与组织分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及TNM分期无关(P>0.05)。发生LOC100130476甲基化的贲门腺癌组织中LOC100130476的表达显著低于未发生甲基化的贲门腺癌组织(0.56±0.21 vs 0.71±0.21),两者差异具有统计学意义(t=-3.055,P<0.05)。结论:1 LOC100130476与食管鳞癌、贲门腺癌的发生、发展密切相关,并可能起抑癌基因的作用。2 LOC100130476第一外显子区甲基化异常增高可能是导致其表达下调的机制之一。3 LOC100130476第一外显子区甲基化状态可能与食管鳞癌、贲门腺癌的恶性程度及进展相关。