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目的:本研究探讨马拉硫磷在兔肉、兔肝,以及大头金蝇(Chrysomya megacephala)幼虫及蛹中的残留量的提取及检测方法;研究马拉硫磷对大头金蝇生长发育的影响;测定取食含有不同浓度马拉硫磷的兔肉、兔肝的大头金蝇幼虫血淋巴可溶性蛋白的含量及组成的时间特征;检测不同马拉硫磷胁迫条件下大头金蝇乙酰胆碱酯酶的活性,并探讨上述三方面在刑事案件中死亡时间推断方面的应用。
方法:在马拉硫磷检测实验中,样品加入无水硫酸钠在研钵中研碎,加丙酮置于摇床中振摇提取,用二氯甲烷及20%硫酸钠溶液在分液漏斗中进行液—液萃取,浓缩后,用处理过的无水硫酸钠及中性氧化铝填柱,用98%的正己烷丙酮溶液淋柱,样品浓缩后丙酮定容至2ml,再用GC—MS检测马拉硫磷残留量。在马拉硫磷对大头金蝇生长发育的研究中,将野外采集的大头金蝇在室内饲养至第三代作为母代开始实验。选取健康家兔,按体重分别灌胃0.5倍、1倍、1.5倍致死剂量马拉硫磷,1h后耳缘静脉注射空气处死。取四肢肌肉、肝脏在—20℃保存。用猪肉在第三代大头金蝇中诱卵,将所诱的卵块按上述浓度分为6组(肌肉三组,肝脏三组),分别用M1,M2,M3,L1,L2,L3表示,肌肉与肝脏空白对照组分别为M0,L0,每组设三个重复三个对照。卵块孵化16h后开始取样一次,依次测量体长体重,直至离食期,二龄、三龄幼虫,离食期幼虫及蛹期内马拉硫磷残留量及乙酰胆碱酯酶活性均进行检测。马拉硫磷胁迫下大头金蝇幼虫血淋巴可溶性蛋白的含量用考马斯亮蓝法测定,用SDS—PAGE法比较不同马拉硫磷剂量下可溶性蛋白组成的时间特征。此外,大头金蝇幼虫体内乙酰胆碱酯酶活性通过乙酰胆碱酯酶试剂盒测定。所得数据均采用SAS9.0及SPSS13.0软件处理。
结果:(1)处理过的兔肉、兔肝及取食的大头金蝇幼虫中均检测到马拉硫磷,灌药量与家兔肌肉、肝脏中残留量有良好的线性关系;家兔肌肉、肝脏中残留量与大头金蝇二龄、三龄幼虫体内含量线性关系良好,但到达离食期后线性关系不显著。(2)相对于取食空白对照的大头金蝇幼虫,取食含有马拉硫磷的兔肉及兔肝上的幼虫生长受到抑制,更晚达到体长体重的最大值,且幼虫期跟蛹期时间更长。(3)不同浓度农药胁迫下,大头金蝇幼虫血淋巴蛋白质的含量在发育初期随着日龄的延长而显著增加,到达最大值后,随着日龄的延长其含量有所降低。但随着马拉硫磷含量的增高,血淋巴蛋白质含量达到最大值的时间延长。(4)马拉硫磷会抑制大头金蝇幼虫中乙酰胆碱酯酶的活性,但抑制效果不强。
结论:(1)相对于传统化学检测法,GC—MS具有更高的灵敏度,更好的重复性及精确度。(2)马拉硫磷会抑制大头金蝇生长发育。(3)大头金蝇幼虫血淋巴可溶性总蛋白含量随日龄呈规律性变化,在马拉硫磷胁迫下其含量及组成均发生变化。(4)马拉硫磷可抑制大头金蝇幼虫体内乙酰胆碱酯酶的活性。