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山羊胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)是制备乳腺生物反应器理想的候选细胞,然而至今仍没有成功建系的报道。本研究选用体内来源的关中奶山羊胚胎和胎儿为试验对象,参照小鼠和人ESCs和EGCs报道的建系方法,系统比较了不同培养条件和传代方法对分离培养不同发育时期山羊胚胎ESCs和胎儿EGCs的影响,主要获得以下结论:1.超排处理45只山羊(42只关中奶山羊,3只波尔山羊),共得到可用胚胎341枚,其中4～16细胞胚胎26枚,桑椹胚144枚,囊胚108枚,孵化胚63枚。在以“桑椹胚全胚、去带桑椹胚、囊胚全胚、ICM和胚盘阶段的胚胎”为起始材料分离山羊类ESCs的试验中,发现“去带桑椹胚、ICM和胚盘阶段的胚胎”分离效果较佳。“桑椹胚全胚和囊胚全胚”在接种饲养层后,贴壁率较低(如囊胚全胚贴壁率为38.1%,内细胞团贴壁率为76.5%,二者差异显著,P﹤0.05),不适宜直接作为分离ESCs的起始材料。2.将ICM培养于小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,以DMEM为基础培养液,研究了含血清和无血清条件下ICM的增殖规律。结果表明,无血清培养可以减少ICM分化的发生。而且在无血清培养条件下比较了添加不同生长因子对ICM(共计48个)增殖的影响,结果表明添加MEF条件培养液,STO条件培养液、大鼠心肌(rHF)条件培养液、LIF、bFGF、两种生长因子同时添加或都不添加对原代ESCs样集落出现率的影响不显著(P > 0. 05),但添加10 ng/mL bFGF稍微有助于ICM增殖。这些结果表明山羊ICM适宜于无血清培养。在山羊类ESCs传代方面,比较了机械法、酶消化法和二者结合的方法对传代效果的影响,酶消化法最高传至2代,机械法最高传至9代,机械法加酶消化的方法最高传至5代。3.山羊类ESCs集落形态多样,类ESCs集落AKP染色阳性,Oct-4和SSEA-1免疫组化染色阳性,SSEA-4阴性。在体外可以自发分化为神经样或上皮样细胞。4.自然配种8只奶山羊,获得交配后28～42d胎儿9只,另外由屠宰场收集山羊胎儿32只。在41只山羊胎儿中,仅对臀冠长为20～25 mm的胎儿(胎龄约为35d)进行比较。最终符合条件的15只胎儿共获得219个原代类EGCs集落。采用生殖嵴与同源胎儿成纤维细胞共培养的方法获得的原代集落数较多,与传统的人与小鼠分离PGCs的分离方法相比差异不显著(P>0.05)。在山羊类EGCs传代方面,比较了机械法、酶消化法或二者结合的方法进行山羊类EGCs传代的效果,酶消化法最高传至4代,机械法和“机械法辅助酶消化法”可传至9～12代,表明机械法可以获得较高的传代数。但是在试验中发现,单纯的机械法切割易于损伤新集落边缘的细胞,从而影响了集落的形态,