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目的:探究microRNA-140-5p(miR-140-5p)对脓毒症树突状细胞(Dendritic cell,DC)表型及功能的影响。方法:⑴取人外周血提取单核细胞,以人重组细胞因子白介素4(IL-4)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导分化体外培养单核细胞来源树突状细胞(monocyte-derived dendritic cells,MoDC)。⑵实验分组及细胞处理方法:对照组:在MoDC体外诱导培养的第五天加入1ug/ml的LPS培养48小时;脓毒症模型组:培养全过程以1ug/ml的LPS给与持续刺激;脓毒症+转染处理组:同脓毒症模型组处理,在培养的第5天转染(miR-140-5p mimics、inhibitor及相应的对照miR-NC)培养12小时后再加1ug/ml浓度的LPS处理48小时。⑶细胞流式检测不同处理组树突状细胞表面共刺激分子(CD80、CD86及HLA-DR)的表达及细胞凋亡情况⑷荧光显微镜检测细胞转染后的胞内荧光信号;荧光定量PCR(q-PCR)检测不同处理组DC miR-140-5P表达情况。⑸酶标仪检测不同处理组DC促T细胞增殖作用的变化;q-PCR检测不同处理组DC TLR-4、NF-κb mRNA的表达变化;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测不同处理组DC TLR-4、NF-κb及Bcl-2蛋白的表达变化。结果:⑴相较于对照组LPS短期刺激的处理,持续的LPS刺激即体外脓毒症模型树突状细胞miR-140-5P表达明显降低(p<0.01);表面共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR的表达明显降低(p<0.05),凋亡明显增加(p<0.01);刺激T细胞增殖的作用减弱(p<0.01)。⑵转染mimics及inhibitor能很好地操控树突状细胞miR-140-5P表达;过表达miR-140-5P可抑制脓毒症DC表面共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR表达下调的情况(p<0.05),树突状细胞凋亡减少(p<0.01),刺激T细胞增殖的作用增强(p<0.05)。⑶TLR-4及NF-κB(p65)mRNA及蛋白在体外脓毒症模型DC的表达量均上调(p<0.05);过表达miR-140-5p能抑制其表达(p<0.05)。bcl-2在体外脓毒症模型DC的表达受抑制(p<0.05);过表达miR-140-5p脓毒症树突状细胞bcl-2表达上调(p<0.05)。结论:脓毒症树突状细胞miR-140-5P表达量减少,成熟受抑制,细胞凋亡增加,刺激T细胞增殖的作用减弱。过表达miR-140-5P可改善脓毒症DC成熟受抑制的情况,减少细胞凋亡,增强刺激T细胞增殖的作用。作用机制可能是靶向TLR-4调控TLR-4/NF-κB信号通路及调控凋亡相关蛋白bcl-2的表达对DC的表型及功能产生影响。实验结果为通过外源性miRNA调控DC功能逆转脓毒症免疫抑制的脓毒症早期治疗策略提供了实验依据。