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甲型流感病毒(Influenza A virus)极易发生变异,其最常见且毒力强，人类通常无法获得持久的免疫力。然而，国际上普遍应用的抗甲流药物基本局限在离子通道抑制剂与神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)抑制剂两个种类，而且部分地区的病毒已开始产生耐药性。甲流病毒的核蛋白(Nucleoprotein，NP)对病毒的基因组复制起到至关重要的作用，其抗原结构稳定，很少变异，可以作为一个理想的药物靶点。目前国际上还没有作用于甲流病毒核蛋白的药物上市。本课题从分子、细胞以及生化水平研究药物的药效和作用机理，采用病毒核蛋白NP作为主要靶点，并与膜蛋白(HA、NA)结合进行多靶点药物筛选，旨在研究开发出更高效、更理想的多靶点抗病毒新药。本课题中研究的KA系列药物为具有相似母核结构的天然化合物，其中KA30系对KA20分子结构添加极性基团的产物。在分子水平上通过Biacore SPR技术研究药物的作用靶点，发现KA30与甲流病毒的NP有较好的结合能力；KA60-3与甲流病毒的HA、NP有较好的结合能力。在细胞水平上，通过ELISA方法证实KA20、KA30、KA60-1、KA60-2、KA60-3、KA60-4均对H1N1有较好的抑制作用，其中KA30的效果强于KA20。通过生化方法研究KA系列化合物对神经氨酸酶NA的抑制作用，证实KA30、KA60-1、KA60-3、KA60-7对神经氨酸酶有一定的抑制作用。通过第三代联合用药的设计方法，即结合MacSynergyⅡ软件，对ELISA实验方法进行改进，研究不同药物之间的协同作用。发现KA30能分别与连花清瘟胶囊、山香圆片和国际上普遍应用的神经氨酸酶抑制剂达菲(奥司他韦)产生协同作用；山香圆片能够分别与达菲、连花清瘟胶囊产生协同作用。这在检测一种药物对病毒是否有效的同时也可对多靶点药物的研究提供依据。在计算机水平上，通过Discovery Studio2.5生物信息学软件模拟分子对接，研究KA30与病毒靶蛋白相互作用的机制。结果证实KA30与NA、NP具有较好的结合能力；与KA20对比，二者在某些相同的位点成键方式类似，KA30在某些位点的作用略强于KA20，显示了其结构的优化。既验证了前面的实验结果，也为药物结构优化和改造提供理论依据。