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目的: 本实验研究“调更汤”通过调控JNK/线粒体信号通路对损伤的下丘脑神经元细胞发挥抗衰老及神经保护作用。 方法: 体内实验:120只4月龄的雌性SD大鼠,共分对照组、模型组、补佳乐组、低剂量调更汤组、中剂量调更汤组、高剂量调更汤组六个组。对照组做假手术,另五组切除卵巢造模。对照组与模型组给予0.9%NaCL灌胃,补佳乐组给予补佳乐0.1167mg/kg.d,调更汤各剂量组分别给予9.69g/kg.d、19.37g/kg.d、38.74g/kg.d灌胃。4周后,运用透射电镜观察下丘脑神经元细胞超微结构改变;运用实时荧光定量PCR技术和Western-bloting实验方法检测JNK、Bax、Bcl-2、p53、caspase3、caspase9基因及其蛋白的表达。 体外实验:GT1-7细胞株培养传代后,分别铺于6、12、96孔板进行实验。组别均为六组:对照组、模型组、E2组、TG-L组、TG-M组、TG-H组。对照组不造模,其余五组用TBTCL造模。对照组与模型组给予完全培养基,E2组给予5uM戊酸雌二醇,TG组给予31.25ug/ml、62.5ug/ml、125ug/ml进行干预。96孔板中分别干预24h、48h、72h后,用CCK8法检测细胞增殖;12孔板中干预24h后,用流式细胞术检测细胞凋亡;6孔板中干预24h后,运用RT-PCR技术和Western-bloting实验方法检测ASK1、MLK3、MKK4、MKK7、JNK、p53、Bax、Bcl-2、caspase3、caspase9基因及其磷酸化蛋白的表达。 结果: 一、体内实验: 1、透射电镜结果表明:与正常对照组相比,模型组大鼠下丘脑神经元细胞形态不完整,线粒体、内质网结构水肿变形,并沉积大量脂褐素。药物干预后,大鼠下丘脑神经元超微结构均有不同程度的改善,线粒体基本恢复原状,内质网的水肿明显减轻,脂褐素的沉积也显著减少。 2、RT-PCR与Western-bloting实验结果:模型组较之对照组,JNK、p53、caspase3、caspase9、Bax基因和蛋白的表达均显著升高,Bcl-2的表达则降低(p<0.05);药物干预后,JNK、p53、caspase3、caspase9、Bax基因和蛋白的表达均显著降低,Bcl-2的表达升高(p<0.05)。调更汤没有显著的剂量效应。 二、体外实验: 1、CCK8实验结果:TBTCL造模能够显著抑制GT1-7细胞增殖能力。且药物干预后能使损伤的GT1-7细胞存活率显著升高。 2、流式细胞术结果:模型组相较于对照组,凋亡率显著增加,用药后,凋亡率显著下降。 3、RT-PCR与Western-bloting实验结果:模型组MLK3、MKK4、MKK7、JNK基因和磷酸化蛋白表达与对照组比较显著升高,Bax、caspase3、casepase9基因和蛋白表达显著升高,Bcl-2基因和蛋白表达显著降低(p<0.05)。中药干预后:MLK3、MKK4、MKK7、JNK基因和磷酸化蛋白表达与模型组比较显著降低,caspase3、casepase9蛋白表达显著降低,Bcl-2基因和蛋白表达显著升高,Bax用药后变化不明显(p<0.05)。ASK1,p53模型组无统计学意义。 结论: 体内实验:1、调更汤能改善损伤的大鼠下丘脑神经元细胞、线粒体、内质网结构,以及减少脂褐素沉积,提示调更汤有抗衰老的作用。2、调更汤抗衰老的作用可能与调控JNK/线粒体信号通路相关。 体外实验:1、调更汤提高损伤的GT1-7神经元细胞存活率,且减少凋亡率。2、调更汤对GT1-7神经元细胞的神经保护作用可能与调控MLK3/JNK/线粒体信号通路相关作用靶点来实现。