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随着全球消灭脊髓灰质炎（脊灰）目标的临近,疫苗衍生病毒（VDPV）的流行、疫苗相关麻痹型病例（VAPP）的发生等对无脊灰状态成果的巩固威胁很大。在消灭脊灰的最后阶段,应尽快消灭脊灰野毒株,并使用灭活疫苗（Inactivatedpoliovirus vaccine,IPV）替代目前广泛使用的脊髓灰质炎减毒活疫苗（Oral poliovirusvaccine,OPV）来维持无脊灰状态,消除自然界的活病毒。对于新的生产厂家考虑到疫苗生产的生物安全性等因素,WHO鼓励研制Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin IPV）。目前尚无成品Sabin IPV上市,于是Sabin IPV的定量检测、质量指标和免疫剂量等都还没有统一标准。前期研究显示,Sabin IPV与野毒株IPV（WT-IPV）在抗原性、稳定性等方面均有差别,于是建立在WT-IPV基础上的定量检测方法和质量控制指标并不适用于Sabin IPV。另外,Sabin IPV与WT-IPV抗原性也有差异,Sabin2型的免疫原性只是野毒株MEF-1株的1/10。为解决疫苗免疫原性不佳的问题,最常用的方法即添加疫苗佐剂。本论文旨在于建立适用于Sabin IPV的D抗原定量方法及蛋白质含量测定方法,完善Sabin IPV检定和质量控制体系;并进一步探索SabinIPV中添加佐剂对免疫效果产生的影响,探讨Sabin IPV中佐剂应用的意义和最适剂量等。本研究第一部分即建立Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活疫苗（Sabin IPV）中D抗原含量及蛋白质含量的检测方法。首先通过摸索各步骤反应条件,优化本实验室建立的多抗ELISA法测定Sabin IPV中D抗原含量的体系,对3个批次的样品进行5次重复测定,结果的变异系数均小于10%。另外,利用蛋白质遇三氯乙酸产生沉淀的特点,对Lowry法进行改良,建立了能够准确测定Sabin IPV中微量蛋白质含量的方法,实验证明,该方法能够排除Sabin IPV中的游离氨基酸、多肽和酚红指示剂等物质的干扰,线性范围为2.5～40ug/ml,r=0.9998,最佳条件下加标平均回收率为95.32%,精密度试验结果批内和批间变异系数均小于10%。研究的第二部分通过将Al（OH）3、DC-Chol和Al（OH）3+DC-Chol 3种不同疫苗佐剂按不同剂量与Sabin IPV（每剂含D抗原Ⅰ型15DU、Ⅱ型16 DU和Ⅲ型22.5 DU）配伍后分别免疫Wistar大鼠,主要检测各组大鼠免疫后血清中和抗体水平、特异性IFN-γ的产生情况以及免疫后各组大鼠CD3/CD4/CD8分子表达的差异。综合上述结果评价在Sabin IPV中添加Al（OH）3或/和DC-Chol对大鼠体液免疫和细胞免疫的影响。通过微量中和实验检测Sabin株脊髓灰质炎特异性中和抗体发现,在Sabin IPV中添加佐剂,普遍于第1针免疫后提高了大鼠血清中3个型特异性中和抗体阳转率;而且3种佐剂还在第2针免疫后提高了Ⅱ型中和抗体的阳转率;Sabin IPV中添加佐剂后,对特异性中和抗体的水平也有不同程度的影响。添加Al（OH）3或DC-Chol在第2针免疫后就产生了高效价的Ⅰ型中和抗体,如添加0.5mgDC-Chol第2针免疫后Ⅰ型中和抗体效价几何均数（GMT）达到未添加佐剂组的3倍以上,显著提高了早期Ⅰ型中和抗体的水平;添加0.1mgAl（OH）3组与未添加佐剂组相比,第3针免疫后Ⅱ型特异性中和抗体效价的几何均数增长2倍以上;添加Al（OH）3或DC-Chol或Al（OH）3+DC-Chol联合佐剂在第2针免疫后就获得了高水平的Ⅲ型特异性中和抗体,GMT比未添加佐剂组增长15倍和12倍,即大大提高了早期Ⅲ型中和抗体的水平。ELISPOT测定针对Sabin株脊髓灰质炎病毒的特异性IFN-γ的结果显示,注射不含佐剂Sabin IPV的大鼠未产生特异性IFN-γ斑点,注射添加了Al（OH）3或DC-Chol佐剂Sabin IPV的大鼠产生了少量特异性IFN-γ斑点,其中添加0.25mgDC-Chol组效果最好,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各产生特异性IFN-γ斑点22.25±6.24、13.75±3.77和22.50±5.92 SFC/106cell提示添加Al（OH）3或DC-Chol佐剂可能对大鼠针对Sabin株脊髓灰质炎病毒的特异性细胞免疫有少许增强作用;流式细胞仪检测各组大鼠CD3/CD4/CD8分子表达的差异的结果显示,Al（OH）3或DC-Chol佐剂的应用能提高大鼠CD3+CD4+/CD3+CD8+值,提示2种佐剂的应用均能增强大鼠的免疫功能,但这种增强作用在佐剂的不同剂量组之间差别不显著。综上所述,Al（OH）3或DC-Chol能够增强Sabin IPV的体液免疫效果,对细胞免疫也有一定增强作用,能在更短的时间内使Wistar大鼠获得更好的保护效果。