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荔枝(Litchi chinensis Sonn.)在我国至少有2000多年的栽培历史,荔枝按照成熟期分为早、中、晚熟品种,在长期的人工栽培与自然选择过程中形成了种类繁多的品种与类型,通过引种,各地的晚熟荔枝种质资源在不断地得到利用,晚熟荔枝的优良遗传基因图谱是荔枝遗传改良的物质基础。鉴于此,我们对收集于福建福清市等地的30份荔枝晚熟种质资源,采用RAPD技术进行遗传多样性分析,确立晚熟荔枝的核心种质;在此基础上,采用花药培养诱导的胚性愈伤组织进行限制生长保存研究,并分离了荔枝胚性愈伤组织GRX基因,为进一步研究离体保存奠定基础。主要研究结果如下:1晚熟荔枝种质资源的RAPD分析本试验采用RAPD技术对30个晚熟荔枝品种进行遗传多样性分析。研究结果表明:19条随机引物共产生277条RAPD带,其中255条为多态性带,多态性百分率为92.06%。根据RAPD分析结果,对供试的30个晚熟荔枝品种采用Jaccard方法进行聚类分析,结果表明:它们之间的遗传相似系数在0.427-0.942之间,平均相似系数为0.625,在D1=19.0处,将30个晚熟荔枝品种分为2大类;在D2=15.0处将其分为6个亚组;在D3=5.0处,可将其划分为24个小组,同一原产地的荔枝品种基本可以划分在一类,也有不在同一类的,说明亲缘关系比较远而且与其他品种存在一定的变异。综合考虑核心种质以最小的资源数量、遗传差异大等因素,初步确定晚熟荔枝元红、下番枝、海垦4号、鹅蛋荔、紫荔、秀石荔、江口荔、牛心荔、牛心荔(变种)、大丁香、南岛无核荔、春藤蜜荔、红绣球、东莞无核荔、玉融晚荔、马贵荔、实生树、玫瑰香荔、立秋荔、琼A13号共20个品种为核心种质。2晚熟荔枝花药培养诱导胚性愈伤组织及其限制生长保存研究采用花药培养从20个晚熟荔枝核心种质诱导胚性愈伤组织。结果表明:不同品种的诱导率不同,诱导率均值在1.7050-63.3233%之间;不同的培养基对同一品种花药愈伤组织的诱导率不同。确定离体保存最佳培养基,元红:1/4 MS+1.0 mg·L-12,4-D+ 25 g·L-1甘露醇+25 mg·L-1PP333+0.4 g·L-1甜菜碱;海垦4号:1/2MS+1.0 mg·L-12,4-D+20 g·L-甘露醇+25 mg·L-1PP333+0.1 g·L-1甜菜碱,均附加20 g·L-1蔗糖,7 g·L-1琼脂,pH 5.8,25±1℃,暗培养,可将晚熟荔枝胚性愈伤组织的继代周期延长至140 d。3晚熟荔枝胚性愈伤组织GRX基因的克隆及其生物信息学分析本研究应用同源克隆与RACE结合,以晚熟荔枝下番枝胚性愈伤组织为材料获得抗性基因GRX的cDNA全长,序列全长697 bp,5’ UTR为81 bp,3’ UTR为217 bp,区域还含有典型的加尾信号AATAA及3′端还含有23个poly(A),该序列与登录GenBank的其它植物GRX基因有较高的同源性,拼接的序列含有一个366个碱基的开放阅读框,编码132个氨基酸,以ATG为起始密码子、TGA为终止密码子。在GenBank上已登录,登录号:GU250736;并对GRX基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果表明:谷氧还蛋白相对分子量为14.6067 kDa,等电点pI6.41;属于亲水性蛋白,存在跨膜结构域,亚细胞定位在线粒体外膜的可能最大为0.850,具有信号肽属于分泌性蛋白的可能性达99.9%。对GRX保守结构域及功能域进行分析,晚熟荔枝胚性愈伤组织GRX具有一个活性中心CPYC的氨基酸基序。通过功能预测与分析,为推测GRX基因在离体保存过程中参与清除活性氧自由基提供依据。