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炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一类慢性复发性免疫紊乱介导的肠道炎症性疾病,主要包括克罗恩病(Crohn,s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)两种临床类型,然而二者的临床表现却不完全相同,CD主要表现为腹痛、腹泻、发热、体重减轻等,而UC主要表现为腹痛、腹泻及粘液脓血便等,给患者的身心带来沉重的打击。目前IBD的病因和发病机制仍不清楚,但是研究表明,遗传易感性、环境因素、肠道屏障功能损伤及免疫调节紊乱是导致IBD发生发展的重要原因。微小RNA(mi RNA)是一类大小约24个核苷酸的内源性单链非编码小分子RNA,多年来的研究表明mi RNA在多种肿瘤和炎症性疾病的发生发展过程中具有至关重要的作用。许多研究表明mi RNA不仅可以调节肿瘤细胞的分化、增殖及凋亡过程,而且可以调控炎症性肠病、多发性硬化、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病患者CD4~+T细胞的分化及功能,然而mi R-21在IBD患者CD4~+T细胞中的表达水平以及对IBD CD4~+T细胞增殖、分化及功能的调节作用仍不清楚。目的:检测mi R-21在IBD患者外周血及结肠粘膜组织内CD4~+T细胞表达水平,探索影响IBD患者mi R-21表达水平的因素以及其在IBD发生发展过程中的作用及意义。方法:收集19例活动期CD患者、15例缓解期CD患者、22例活动期UC患者、17例缓解期UC患者及24例健康对照者外周血单个核细胞及结肠粘膜组织,采用实时荧光定量PCR技术检测样本中mi R-21表达水平。采用免疫磁珠法从外周血单个核细胞和结肠粘膜组织中分离纯化出CD4~+T细胞、CD8+T、B细胞、树突状细胞、中3性粒细胞、单核细胞及肠上皮细胞,采用荧光定量PCR技术检测每种细胞内mi R-21的表达水平。分离纯化IBD患者和对照者外周血及肠粘膜组织内CD4~+T细胞,采用荧光定量PCR技术分析IBD患者和对照者体内mi R-21表达水平差异。分离IBD患者和健康对照者外周血CD4~+T细胞体外激活培养的同时再分别利用TNF-a,(40)L-1,IL-6,IL-17A等细胞因子刺激48h,收集细胞后采用荧光定量PCR技术分析不同细胞因子对CD4~+T细胞中mi R-21表达的调控作用。收集经抗TNF-a单克隆抗体(7)infliximab(11)IFX(8)治疗前及治疗后的CD患者外周血和炎症部位肠黏膜组织CD4~+T细胞,采用荧光定量PCR技术检测治疗前后mi R-21表达量的变化。使用慢病毒转染IBD患者及健康对照者外周血CD4~+T细胞,采用荧光定量PCR技术检测CD4~+T细胞各亚型特异性表达的转录因子及细胞因子m RNA水平的变化,采用ELISA技术检测IL-17A、TNF-a、IFN-g等炎症因子蛋白水平的变化。结果:mi R-21在活动期IBD患者外周血单个核细胞及炎性肠粘膜组织内表达水平明显增高,进一步研究发现在外周血CD4~+T细胞是mi R-21重要的表达来源,在结肠粘膜组织内肠上皮细胞及粘膜固有层内CD4~+T细胞是重要的表达来源。进一步研究结果表明mi R-21在活动期IBD患者外周血及炎性肠粘膜组织CD4~+T细胞内表达水平较健康对照者显著增高。体外细胞因子刺激后发现TNF-a可显著上调CD4~+T细胞内mi R-21表达,IL-6可轻度上调其表达水平,但是IL-17A、IFN-g、(40)L-23等对CD4~+T细胞内mi R-21表达水平无显著影响。给予活动期CD患者IFX治疗后发现,外周血及结肠粘膜组织CD4~+T细胞内mi R-21表达量显著降低。利用慢病毒转染的方法使外周血CD4~+T细胞高表达mi R-21后,Th17细胞特异性表达的转录因子RORC及细胞因子IL-17A m RNA水平显著升高,ELISA结果表明IL-17A及TNF-a蛋白水平亦显著高于对照组。但是Th1、Th2及Treg细胞特异性表达的转录因子T-bet、Gata-3、Foxp3及各自表达的细胞因子IFN-g、IL-4 IL-10无论在m RNA水平还是在蛋白水平均无显著变化。结论:mi R-21在活动期IBD患者外周血及结肠粘膜组织CD4~+T细胞内表达水平明显上调,TNF-a可显著上调CD4~+T细胞内mi R-21表达水平,抗TNF-a治疗能显著下调IBD mi R-21表达量。深入研究表明mi R-21主要通过促进Th17细胞分化和TNF-a分泌参与IBD的发生和发展,有望能为临床诊治IBD提供新的靶点。