酶法制备阿魏酰低聚糖的研究

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啤酒糟作为啤酒生产过程中的主要副产物,约占所有副产物总量的85%。啤酒生产过程中,原料麦芽经过糊化、糖化、过滤之后得到的固体残留物质就是啤酒糟,其含有大量的纤维素和半纤维素成分,且产量巨大。阿魏酰低聚糖(Feruloyl oligosaccharides,FOs)是阿魏酸与低聚糖通过酯键连接而成的一种重要的功能性低聚糖,兼有阿魏酸与低聚糖的生理功能特性,主要存在于植物细胞壁中。因此,啤酒糟可以作为FOs的重要来源,提升啤酒糟的附加值,减轻环保压力。(1)阿魏酸酯酶是一种羧酸酯酶,能够水解阿魏酸与低聚糖相连的酯键,释放出阿魏酸。对产含有阿魏酸酯酶的纤维素酶工业生产菌株草酸青霉114-2采用农杆菌介导的同源重组敲除阿魏酸酯酶基因,最终获得正确的敲除转化子。选用3种不含阿魏酸酯酶的商品酶(纤维素酶1;纤维素酶2;木聚糖酶)分别酶解啤酒糟制备FOs,得到最佳酶添加量。在单因素的基础上,对3种商品酶采用响应面法进行复配,最佳复配结果是纤维素酶1 154.62 U·g-1底物,纤维素酶2 114.18 U·g-1底物,木聚糖酶143.94 U·g-1底物。在最佳复合酶添加量的结果上,研究其最佳酶解工艺条件,结果为:底物浓度为15 g·L-1,pH为6.0,酶解时间为10 h,酶解温度为40℃,此时,FOs的产量是8.06μmol·g-1底物。(2)FOs酶解液首先经过乙醇沉淀,确定了最佳乙醇沉淀浓度为90%。再通过大孔吸附树脂D101进行分离,得到FOs固体样品。FOs固体样品中含有3.06%(w·w-1)的键合态阿魏酸,其单糖组成主要是阿拉伯糖和木糖。紫外光谱和红外光谱分析检测FOs固体样品,证明该物质存在酯化的阿魏酸和是含有酯键的糖类物质。(3)FOs具有良好的体外抗氧化能力,通过实验证明,FOs能较好的清除羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基,同时FOs也具备较强的还原力和对金属离子具有螯合作用,抗氧化效果均高于阿魏酸和低聚木糖。FOs和低聚木糖都对乳酸片球菌和双歧杆菌的生长具有促进作用。通过大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌实验发现,FOs对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均无抑制作用,反而促进其生长。
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