论文部分内容阅读
[目的]建立HBV转基因小鼠移植型肝癌模型,通过对其进行免疫抑制药物干预,探讨免疫抑制状态下血清学HBsAg阳性表达对小鼠肝脏肿瘤复发及进展的影响,进而为临床应用HBsAg阳性供肝行肝移植治疗以挽救晚期肝癌患者的可行性提供理论依据。[方法]实验分为两部分：第一部分,建立小鼠移植型肝癌的动物模型：实验前期进行小鼠H22肿瘤细胞保种传代,选用Balb/c小鼠90只,分别于脾包膜下接种不同数量的肿瘤细胞株,按照接种肿瘤细胞数量随机分为3组(A组：1*105,B组：1*106,C组：1*107),每组30只；术后给予免疫抑制剂腹腔注射,模拟肝移植术后免疫抑制状态,分别于术后1周、2周及3周观察肿瘤复发情况。第二部分,研究免疫抑制状态下血清学HBsAg阳性表达对小鼠肝癌复发及进展的影响：实验组(H组)选用HBV转基因Balb/c小鼠30只,对照组(D组)选用普通Balb/c小鼠30只,体重均为18g-22g,根据术后处死时间各组再随机分为3小组：术后一周(H1和D1)、术后两周(H2和D2)、三周(H3和D3),每组各10只。按照第一部分的实验方法,分别给予,脾包膜下接种H22肿瘤细胞株(含肿瘤细胞数为1*106个),术后给予环孢素(5mg/Kg/d)、甲泼尼龙琥珀酸钠(10mg/Kg/d)进行免疫抑制干预治疗至观察结束,模拟肝移植术后免疫抑制状态。分别于术后1周、2周、3周处死小鼠,观察比较各组小鼠肿瘤复发率、荷瘤肝重；HE染色观察肿瘤组织形态；免疫组组织化学法检测肝组织ICAM-1、 VEGF及PCNA的表达。采用SPSS15.0统计软件对数据进行处理,计量资料以均数±标准差的形式表示,对数据进行正态性检验和方差齐性检验,采用独立样本的t检验或方差分析,以P<0.05为具有统计学差异；计数资料比较采用χ2检验,检验水准a=0.05。[结果]第一部分：接种105数量级H22肿瘤细胞株的小鼠术后1周、2周、3周的复发率分别为：0(0/10)、20%(2/10)、30%(3/10)；接种106数量级肿瘤细胞株小鼠术后1周、2周、3周的复发率分别为：20%(2/10)、40%(4/10)、70%(7/10)；接种107数量级肿瘤细胞株小鼠术后1周、2周、3周的复发率分别为：50%(5/10)、80%(8/10)、80%(8/10)。成功建立小鼠移植型肝癌模型,为进行进一步相关实验研究提供稳定实验动物模型。第二部分：不同组别小鼠肝脏肿瘤复发率：H1(20%),H2(50%),H3(80%)；D1(20%),D2(40%),D3(70%),实验组与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。荷瘤肝重：H1(1.04±0.05)g,H2(1.16±0.06)g,H3(1.29±0.06)g；D1(1.01±0.05)g,D2(1.14±0.04)g,D3(1.25±0.08)g。病理结果：H1和D1组肝组织HE染色偶可见灶状肿瘤组织；H2及D2组HE染色可见肝组织内片状肿瘤病灶；H3及D3呈现弥漫性肝癌表现。肝组织PCNA表达情况：H1阳性指数为22.2%,D1阳性指数为22.8%,两组无统计学差异(P=0.81)：H2阳性指数为44.2%,D2阳性指数为43.6%,两组无统计学差异(P=0.84)；H3阳性指数为56.8%,D3阳性指数为53.4%,两组无统计学差异(P=0.39)。VEGF表达情况：H1阳性指数为20.8%,D1阳性指数为17%,两组无统计学差异(P=0.09)；H2阳性指数为25.9%,D2阳性指数为26.7%,两组无统计学差异(P=0.77)；H3阳性指数为36.2%,D3阳性指数为37.3%,两组无统计学差异(P=0.91)。ICAM-1表达情况：H1阳性指数为15.4%,Dl阳性指数为14.5%,两组无统计学差异(P=0.59)；H2阳性指数为23.2%,D2阳性指数为22.8%,两组无统计学差异(P=0.79)；H3阳性指数为31.3%,D3组阳性指数为29.4%,两组无统计学差异(P=0.25)。[结论]1、脾包膜下接种H22肿瘤细胞可成功建立稳定小鼠移植型肝癌模型。2、接种肿瘤细胞负荷与术后小鼠肿瘤复发率呈正相关。3、通过对免疫抑制状态下HBV转基因Balb/c小鼠移植型肿瘤复发动物模型的观察研究,认为血清学HBsAg阳性表达对小鼠肝癌复发及生长无显著影响。4、本研究通过动物模型实验模似HBsAg阳性供肝对肝移植术后肿瘤复发的影响,为临床HBsAg阳性供肝的应用提供理论和实验依据。