白腐菌降解菌草及其降解酶系的特性研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:ixiay
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木质纤维素主要由纤维素、半纤维素和木质素组成,是自然界中广泛存在可再生的数量巨大的生物质资源,但目前仍未被充分利用,其主要障碍在于木质素难于降解和转化;白腐菌是目前发现的对木质素降解最有潜力的微生物之一。黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)作为木质素生物降解模式种,一直是被广泛研究的对象,但它的木质素降解酶活性并不令人满意,如常规条件不产生漆酶,而漆酶却是木质素酶系的重要成员。因此,选育高产木质素降解酶菌株、了解其降解机制和木质素降解酶分离纯化是本研究木质素降解的主要研究内容。本文以探索高效降解木质素为指标,通过测定14株菌草食用菌在愈创木酚、苯胺兰和鞣酸培养基的培养上的生长状况和酶活分泌的能力,得到8株菌株都能产生阳性反应;以木质素和综纤维素失重的比值(SF指数)为指标,对这几株进行了复筛,侧耳WP1和平菇10969选择性指数分别为2.31和1.86。与黄胞原毛平革菌P.chrysosporium RP78和P.chrysosporium BKM-F-1767两株模式菌相比,菌株具有好的生长优势、强的酶系分泌能力和降解的优势。固体发酵培养平菇10969,菌草培养白腐菌过程中,只检测到一种木质素过氧化物酶—漆酶(laccase),酶活达1807U/mL,而随着时间的延长,Lac酶活逐渐降低,而未检测到LiP和MnP,傅里叶红外光谱分析(FTIR)基质表面基团表明化;发酵液经过硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析纯化倍数达到3.67,得到酶蛋白的分子量约为40kDa,研究了其酶学性质。同时克隆了纤维素酶基因(egl2)和半纤维素酶基因(xyn2),表达蛋白并测定酶活,将粗酶液处理不同的纤维材料,结果表明,其还原糖的产量:综纤维素(酸解)>菌草(白腐菌处理)>未处理的菌草。本文进行几种菌草食用菌对菌草木质素降解菌的筛选、漆酶的分离纯化和纤维素酶处理纤维材料方面的研究。白腐菌的利用,使得草质资源的充分利用,同时对污染物的降解以及燃料乙醇等有着重要的应用意义。
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