基于ISSR分子标记的蜡梅遗传多样性研究

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蜡梅为我国特产的优良冬季香花树种,分布广,栽培历史悠久,品种繁多。本文采用形态特征和ISSR分子标记对29个蜡梅品种材料进行了蜡梅花部表型多样性和遗传多样性分析,旨在为蜡梅品种选育、蜡梅品种分类、系统与进化生物学研究提供理论基础。主要研究结果如下:1.对29份蜡梅材料进行了花部形态特征的观察记载,从中选取11个性状进行主成分分析,得出“中被片长度”、“内被片紫纹”、“花径”、“花色”是蜡梅品种分类中的重要的特征因子。对蜡梅ISSR反应体系进行了优化,建立了适合蜡梅ISSR扩增的体系和程序。该反应体系(总体积为20μl)如下:10×扩增缓冲液2μl(Tris-Cl 200mmol/L PH 8.3, KCl 500mmol/L, 0.5%Triton-X 100),1.6μl Mg2+ (25mmol/L),0.6μl dNTPs (dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10umol/L引物2.0μl,1.5 UTaq聚合酶,DNA模板约30 ng。扩增反应程序为:94℃预变性5min,再进入38个PCR循环(94℃变性1 min,52~59℃退火1 min,72℃延伸1 min),最后72℃延伸10 min,4℃保存。扩增产物用2%琼脂糖凝胶进行电泳分析。3.应用10个ISSR引物对29份蜡梅材料进行了ISSR扩增,获得了75条可统计的条带,其中多态性条带38条,多态性条带比率为50.7%。平均观测等位基因数为1.5325,平均有效等位数为1.2956,平均Nei’s基因多样性指数为0.1873,平均Shannon信息指数0.2321遗传多样性水平较高。
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