盐霉素预混剂在大鼠慢性毒性试验与肉鸡体内残留消除

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本文采用高效液相色谱-质谱串联法(HPLC-MS/MS)通过建立24%盐霉素预混剂在肉鸡组织样品(肝脏、肾脏、皮脂、肌肉)的残留检测方法,对其在肉鸡体内的残留消除进行研究,并对该预混剂在SD大鼠的慢性毒性进行评价。选取240只健康的SPF级SD大鼠,雌雄各半,体重50~70 g,随机分为空白对照组(0 mg/kg·bw)、低剂量组(3 mg/kg·bw)、中剂量组(9 mg/kg·bw)、高剂量组(15mg/kg·bw)经饲喂给药进行180 d慢性毒性实验,每15 d称量大鼠体重计算其增重率。于试验第60、120、180 d各组随机抽取20只大鼠(雌雄各半),采集血液进行血液学指标、血液生化指标的检测;采集脏器进行脏器系数、器官含水量的测定和病理学检查。其结果显示:低剂量的添加对正常的生理生化功能几乎不产生影响并具有良好的促生长作用,但长期、高剂量添加会导致大鼠的红细胞计数、血红蛋白含量和红细胞压积升高,还影响总胆红素、总蛋白含量和碱性磷酸酶、谷丙转氨酶的活性。病理学检查发现中、高剂量组的脏器有较多的实质性病变,尤以心、肝、肺、肾的病变较为明显。根据实际采食量计算每只大鼠摄入该盐霉素预混剂的最大无作用剂量为9.98mg/(kg·d),经药物效价折算盐霉素的最大无作用剂量(NOEL)为2.40 mg/(kg·d)。肉鸡组织样品用异辛烷-乙酸乙酯(8:2)提取,进行HPLC-MS/MS分析测定。色谱柱为Luna C18,流动相为0.1%甲酸水—甲醇,梯度洗脱,流速为0.3 m L/min;电喷雾离子源,多级反应监测正离子模式,外标法单点定量。组织样品中添加盐霉素的线性关系良好,在120~1800μg/kg范围内的相关系数均在0.9990以上。其检测限为60μg/kg,定量限为120μg/kg。在LOQ、1/2MRLs、MRLs(肌肉、肾脏为600μg/kg,皮脂为1200μg/kg,肝脏为1800μg/kg)、2MRLs四个添加水平下,盐霉素的回收率为82.83%~110.68%,批内变异系数为1.21%~8.86%,批间变异系数为2.33%~6.74%。该方法准确、灵敏,适用于盐霉素在肉鸡组织中的检测。试验选取70只黄羽肉鸡,4~5周龄,随机抽取10只为空白对照组,剩余60只为24%盐霉素给药组,给药剂量按250 g/1000 kg饲料进行混饲给药42 d。停药后0、6、12、18、24、36、48、72、120、168 h采集组织样品(肝脏、肾脏、肌肉、皮脂),进行HPLC-MS/MS测定,计算药物残留参数。实验结果显示经24%盐霉素预混剂饲喂后,停药0h后,在肉鸡组织中的残留量均远低于最高残留限量,残留消除时间为0h。
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