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目的:基于前期研究基础,继以研制构建云南春燥证动物模型。以中医病因学理论为指导思想,通过复制云南春燥环境作用于小鼠,观测小鼠的一般生物表征、气管及肺组织结构和气道RS、AQP5、DPPC、IL-8含量的变化,并“以方测证”,研讨云南春燥环境对小鼠气道津液代谢的影响。阐析以上各项指标与中医“燥胜则干”、“燥犯肺卫”、“肺卫失宣”、“肺津耗伤”、“卫外御邪”等理论的内在联系,以期从宏观表象、组织结构、微观分子等多个层面,客观地评价动物模型的科学性、合理性及可靠性,旨在为探索科学的、合理的、可重复的云南春燥证动物模型提供依据。方法:随机将60只昆明种小鼠分为4组,正常组、模型组、加水组、桑杏汤组,每组15只,均置入人工气候培养箱中饲喂。正常组设置为常温常湿环境,饲喂常规食料;模型组、加水组、桑杏汤组3组均设置为云南春燥气候环境,并饲喂辛辣香燥食料;自施加干预条件第1天起,每日上午8点实行灌胃处理,桑杏汤组灌以桑杏汤,加水组灌以白开水,为期14天。实验期间,每日观察记录小鼠一般生物表征、饮食饮水、体重等情况变化,于第15天安排取材。观察检测各组小鼠的气管、肺组织形态结构及气道中RS、AQP5、DPPC、IL-8含量的改变。结果:1云南春燥环境对小鼠一般生物表征的影响正常组小鼠在实验饲养期间神态自然活跃、精神情况良好,爪甲光泽明润,被毛顺泽,尿质清澈,大便质软,少有撕斗,未见抓咬伤痕。与正常组相比较,模型组在施加干涉条件后,逐渐表现出精神焦躁烦怒,爪甲色暗偏干瘪,被毛枯糙皱卷,脱落较重,尿色发黄,大便质地干燥坚硬,撕斗啃咬迹象频繁明显,可见尾背部多处伤痕血迹;加水组情况稍好于模型组,亦相继出现情绪烦躁,爪甲色暗偏干,被毛干枯,毛躁少泽,尿色偏黄,大便质地偏干燥,有撕斗现象,尾背部有少量咬痕;桑杏汤组初起偶有情绪异常兴奋,后逐渐趋于平和,精神状态良好,爪甲光泽偏于明润,被毛有泽、略显毛糙,尿色稍黄,大便质地略有干燥,鲜有撕打行为,尾背部少见痕迹。与正常组相对比,模型组小鼠饮水量有增加(P>0.05)、饮食量明显减少(P<0.01);加水组、桑杏汤组小鼠饮水量有轻度增加(P>0.05)、饮食量有轻微减少(P>0.05)。与模型组相比,加水组小鼠饮水量相对减少(P>0.05)、饮食量相对增加(P>0.05);桑杏汤组小鼠饮水量相对减少(P>0.05)、饮食量增加明显(P<0.05)。2云南春燥环境对小鼠气管、肺组织结构形态的影响正常组小鼠,气管腔结构清晰规则,黏膜表层齐整,未见损伤脱落、充血;肺组织结构形态清楚完整,肺泡壁结构完好,成空泡状薄壁。模型组小鼠,气管黏膜层呈现出局部明显伤损、薄化,纤毛上皮细胞部分缺损、断裂,黏膜层大量炎性细胞、部分浸润透明软骨层,血管壁可见充血;肺组织气道重塑轻微变形,支气管壁轻度增生,细支气管部分断裂脱落、管壁增厚伴炎性滤泡形成,炎性细胞浸润肌层,大量红细胞及黏性渗出、肺泡融合,管内可见明显充血。加水组小鼠,气管黏膜层呈现部分增生伴炎性细胞,纤毛上皮细胞部分脱落,有炎性细胞浸润;肺部支气管肌层增生增厚,大量炎性细胞、红细胞,肺泡壁部分消失融合成肺大泡,炎性细胞浸润。桑杏汤组小鼠,气管形态结构较为齐整规则,黏膜层比较完整,少量炎性细胞,纤毛柱状上皮少有脱落、缺失;肺组织支气管结构形态较清晰,腔内无出血,肺泡壁有些许渗出,少量炎性细胞。3云南春燥环境对小鼠气道中RS、AQP5、DPPC、IL-8含量的影响3.1对小鼠气道RS含量的影响与正常组相对比,模型组小鼠气道RS含量明显降低(P<0.01);加水组小鼠气道RS含量显著下降(P<0.05);桑杏汤组小鼠气道RS含量有轻度提高(P>0.05)。与模型组相对比,加水组小鼠气道RS含量有减少(P>0.05);桑杏汤组小鼠气道RS含量明显提高(P<0.01)。3.2对小鼠气道AQP5含量的影响与正常组相对比,模型组、加水组小鼠气道AQP5含量明显降低(P<0.05);桑杏汤组小鼠气道AQP5含量有轻微降低(P>0.05)。与模型组相对比,加水组小鼠气道AQP5含量轻微提高(P>0.05);桑杏汤组小鼠气道AQP5含量提高明显(P<0.05)。3.3对小鼠气道DPPC含量的影响与正常组相对比,模型组小鼠气道DPPC含量降低显著(P<0.01);加水组小鼠气道DPPC含量降低明显(P<0.05);桑杏汤组小鼠气道DPPC含量轻微降低(P>0.05)。与模型组相对比,加水组小鼠气道DPPC含量有轻度提高(P>0.05);桑杏汤组小鼠气道DPPC含量显著提高(P<0.05)。3.4对小鼠气道IL-8含量的影响与正常组相对比,模型组、加水组小鼠气道IL-8含量提高明显(P<0.05);桑杏汤组小鼠气道IL-8含量有轻微提高(P>0.05)。与模型组相对比,加水组小鼠气道IL-8含量有轻微降低(P>0.05);桑杏汤组小鼠气道IL-8含量有大幅度降低(P>0.05)。结论:(1)云南春燥环境下,小鼠的一般生物表征表现出干燥少津之征,根据中医“司外揣内”原理,及“诸涩枯涸,干劲皴揭,皆属于燥”、“燥胜则干”等理论,说明小鼠体内存在燥证病机,从而表现为燥证之征,小鼠之宏观表征符合燥证动物模型的基本特征;且小鼠气管、肺组织形态呈现出不同程度的损伤和气道RS、AQP5、DPPC、IL-8含量的变化,进一步说明云南春燥环境对小鼠生理功能、器官组织结构以及气道微观分子等均有一定程度影响。(2)云南春燥环境使小鼠气道RS、AQP5、DPPC、IL-8含量有改变,表明云南春燥环境下小鼠的津液损伤,从而影响肺宣发卫气、御邪侵袭的功能,气道出现免疫反应,从微观层面,阐释了春燥环境对肺主宣发肃降、输布津液、肺卫御邪功能的影响。(3)依据“有是证,用是方”的方证对应原则,应用“以方测证”方法,经治燥方药桑杏汤的干预后,小鼠的燥证表征、组织学检查及气道RS、AQP5、DPPC、IL-8均发生不同程度改善,说明本实验动物模型具有云南春燥证的属性。(4)在云南春燥环境下,小鼠气道RS、AQP5、DPPC含量均显著减低,IL-8含量上升明显,方药桑杏汤干预后,气道RS、AQP5、DPPC含量均提高,IL-8含量下降。说明云南春燥环境可对小鼠气道津液代谢及肺卫功能均产生影响,与中医“燥胜则干”、“燥犯肺卫”、“肺卫失宣”、“肺津耗伤”、“卫外御邪”等理论相合。初步将RS、AQP5、DPPC、IL-8纳入云南春燥动物模型的观测及评价指标体系,以期进一步研究。(5)桑杏汤组小鼠的各项指标均明显优于加水组,说明云南春燥环境所致之燥证表征,缘于风、燥邪气损伤津液而为,邪气不除,津液难复。故单纯依靠饮水并不能缓解,唯有祛邪润燥才能生津。桑杏汤具有疏风祛燥、润肺生津的功效,用之则风燥邪气被祛除,肺之宣降功能得恢复,肺津得以敷布,卫气得以宣发,故效果显著。也间接进一步表明“以方测证”之方与本实验模型之证存在对应关系。