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[目的]前期课题组筛选出EBV诱导淋巴细胞转化的4个关键分子,分别是CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因。本课题通过荧光定量PCR和Western blot技术检测正常人淋巴细胞和体外EBV转化淋巴母细胞中CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11差异表达情况,验证前期课题组基因芯片结果,为EB病毒转化淋巴细胞的分子机制提供实验依据。 [方法]采集7例健康献血员外周静脉血并从中分离出正常人淋巴细胞,用EBV体外诱导淋巴细胞转化,构建永生化的淋巴母细胞模型。提取EBV转化淋巴母细胞及配对的正常人淋巴细胞的蛋白及RNA,应用Western blot和荧光定量PCR方法,检测CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV体外转化的淋巴母细胞及配对的健康成人正常淋巴细胞中的表达。 [结果]本实验成功建立了7例EBV转化淋巴母细胞样细胞系,并检测了CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV转化淋巴母细胞及配对的正常人淋巴细胞中的表达情况。CXCR4基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞CXCR4的mRNA与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.718倍,差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示,CXCR4在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达下调1.894倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。c-FOS基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞中c-FOS的mRNA与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.641倍,差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示,c-FOS在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.323倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。FYN基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞中FYN的mRNA与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.451倍,差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示,FYN在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.019倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。PTPN11基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞PTPN11的mRNA与正常人淋巴细胞相比,表达上调2.057倍,差异具有统计学意义(P<0.01);Western Blot结果显示,PTPN11在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达上调2.127倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。 [结论]1. CXCR4在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和mRNA转录均低于其在正常人淋巴细胞。2. c-FOS在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和mRNA转录均低于其在正常人淋巴细胞。3. FYN在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和mRNA转录均低于其在正常人淋巴细胞。4. PTPN11在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和mRNA转录均高于其在正常人淋巴细胞。