论文部分内容阅读
白腐真菌生物技术是生物学理论与应用相结合的典型产物,研究白腐真菌模式菌种黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)厚垣孢子的生产与应用是本课题的主要内容。通过对P. chrysosporium培养条件的控制,可形成具有一定机械强度和大小的菌丝球,在对菌丝球培养的基础上生产大量厚垣孢子。目前,大量研究主要集中在木霉的厚垣孢子,但尚没有通过液态培养P. chrysosporium大量产生厚垣孢子的报道。而真菌一旦形成了厚垣孢子,便有了较长的货架期,因此可进行产业化开发。本课题研究有三部分:第一部分是先介绍并优化一种培养P. chrysosporium产厚垣孢子的液体培养条件。在适合P. chrysosporium生长的培养基中加入一定浓度的诱导剂-a可以促使厚垣孢子的大量产生。对培养条件如温度、转速、pH值、培养基主要成分进行优化,得到提高厚垣孢子产量的最佳条件。在分生孢子的接种量为1.1×107个/mL,温度33℃、转速180r/min、葡萄糖20.0g、酒石酸铵4.0g、MgSO4·7H2O1.5g、诱导剂-a3.5g、吐温800.5mL、苯甲醇0.5mL、KH2PO42g、维生素B10.001g、微量元素液70mL、pH4.5左右的培养条件下,菌丝球产量干重4.1g/L,厚垣孢子最大产量25.4×108个/L。第二部分是对厚垣孢子的性质进行研究。厚垣孢子在生物降解、环境保护、生物防治方面有很广阔应用前景。鉴于此,本实验分别在萌发温度、培养基pH值、抗紫外特性、不同处理方法、不同保存条件对分生孢子和厚垣孢子影响进行对比研究。不同温度对两种孢子萌发的影响具有显著差异。厚垣孢子萌发温度范围为10-45℃,适宜萌发温度为25-37℃;分生孢子萌发温度范围为25-37℃,适宜萌发温度为30-37℃,在同温度条件下,厚垣孢子萌发较分生孢子快,芽管的生长速度也快。厚垣孢子和分生孢子对pH值要求相对不严格,厚垣孢子适宜的pH值为1.5-9.0,以4.5为最佳;分生孢子适宜的pH4.5-7.5,以pH6.0为最佳,说明孢子的萌发在中性偏酸的环境中较为之合适。紫外线(15W、20cm)照射90s时对厚垣孢子的萌发率为20%左右,对分生孢子完全抑制。两种孢子的保存条件和时间存在差异。自然干燥室温储存120d后检测,厚垣孢子由108个/g下降到106个/g,分生孢子由108个/g下降到103个/g。研究结果厚垣孢子抗逆性方面比分生孢子具有优势,在保存货架期方面也比分生孢子具有优势。这较之以菌丝和分生孢子为主体的生物制剂有较大的应用推广潜力。第三部分是厚垣孢子对除草剂阿特拉进降解。由于除草剂广泛使用在土壤中长期存留,对土壤造成污染,对生态环境和人类健康都将带来危害,我们利用厚垣孢子的抗逆性和特殊的酶系统,研究厚垣孢子对土壤中长效残留除草剂阿特拉津的降解效果。在实验室条件下,土壤中加入P. chrysosporium厚垣孢子,孢子可以在土壤中定殖和生长,通过其代谢作用降解土壤中的AT。在模拟室外大田环境中,厚垣孢子加入土壤中对阿特拉津的降解率达到80-90%,达到对污染土壤修复的目标。本实验对P. chrysosporium厚垣孢子化菌剂在土壤修复的应用方面进行了初步探索。