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大部分植物病毒通过与其传播介体互作而实现水平传播。烟蚜(Myzus persicae)RPS2蛋白是一种核糖体蛋白,研究证实,RPS2在烟蚜传播马铃薯Y病毒时起了重要作用。利用GenBank查找已报道的烟蚜RPS2蛋白序列,进而得到烟蚜RPS2基因序列,根据实验目的设计引物,通过RT-PCR技术,扩增得到了烟蚜RPS2基因的cDNA全长序列。将烟蚜RPS2基因的cDNA全长序列连接到PGEM-T easy Vector上并转入大肠杆菌(E.coli)NM522菌株中扩增并保存,再以RPS2基因的cDNA全长序列为模板,分别设计用于扩增RPS2基因全长序列的前段、中段和末段三个不同片段的引物,PCR扩增得到三段RPS2基因的部分片段,分别命名为RPS2—1、RPS2-2和RPS2-3。同时为了构建载体在三个片段两端分别引入不同的酶切位点,RPS2-1片段的5’端和3’端分别引入了EcoRI和HindⅢ两个限制性内切酶位点,而RPS2-2和RPS2-3两个片段的5’端和3’端分别引入了EcoRI和BamHI两个限制性内切酶位点。通过酶切、连接等常用的分子实验方法,将三个片段分别连接到LITMUS-28i质粒上,构建成三个含RPS2基因片段的dsRNA原核表达载体。载体通过PCR,酶切以及测序等方法进行验证,结果表明构建的重组载体与预期相同。将三种重组载体分别转化到大肠杆菌(E.coli)HT115(DE3)菌株内,由于LITMUS-28i质粒上存在两个反向的T7启动子,同时大肠杆菌菌株HT115是RNA酶Ⅲ缺陷型菌株,因此经过IPTG诱导,大肠杆菌菌株HT115的细胞内可以自行表达dsRNA并可以通过CTAB法提取到。提取到片段的大小、DNase和RNaseA酶切的结果都能证实,该载体可以表达预期的dsRNA。将这三种体外表达的dsRNA加入烟蚜人工饲料中,证明食用该饲料对烟蚜生长发育并无影响。以上实验为评价这三种dsRNA对烟蚜传播PVY的影响奠定了基础。