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卵母细胞体外成熟调控机理的研究对于开发卵巢中大量卵母细胞的资源,促进辅助生殖技术的提高具有重要的理论意义和应用价值。作为常用的小型试验动物大鼠和小鼠,其在生殖生理功能的调节方面存在明显差异,特别是在促性腺激素调控卵母细胞成熟方面,现有的研究报道存在很多矛盾之处。为了阐明哪种促性腺激素对卵母细胞减数分裂的恢复起着重要作用,本实验利用不同的培养模型研究了FSH和LH/hCG对小鼠和大鼠卵母细胞体外成熟的作用和体外培养条件。为今后选择不同动物卵母细胞进行体外研究时提供理论依据。 在体外自发成熟模型中,大鼠的去卵丘裸卵(DO)自发成熟发生要较卵丘包被的卵母细胞(CEO)早,DO培养2h时GVBD%可达到88%,而CEO培养2h的GVBD%为53%。CEO和DO培养8h时都开始排出PB1;在卵母细胞成熟抑制模型中,4mM次黄嘌呤(HX)和25μM的异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)是小鼠卵母细胞成熟的有效抑制剂,但4mM的HX抑制大鼠卵母细胞成熟效果不理想,用HX-M199和HX-MEM培养24h,GVBD率分别为61%,81%,而IBMX有效抑制大鼠卵母细胞自发成熟的最小浓度为50μM,IBMX可以降低大鼠CEO和DO的GVBD率,但CEO中的卵母细胞GVBD率要显著低于DO的GVBD率,100μM的JBMX处理24h后,大鼠CEO和DO的GVBD率分别为24%,84%,提示卵丘细胞的存在可以延迟大鼠卵母细胞的自发成熟,有助于抑制卵母细胞成熟,但在小鼠上CEO和DO的自发成熟差异不明显。在CEO体外抑制和卵泡包被的卵母细胞(FEO)培养模型中,FSH(50U/L)能显著诱导HX和IBMX抑制的小鼠CEO和FEO体外成熟.但是FSH(50~200U/L)和LH(100~10,000IU/L)都不能诱导大鼠CEO和FEO的体外成熟。 RS-21607(azalanstat)是促减数分裂甾醇MAS合成酶CYP51蛋白的特异性抑制剂,与小鼠上的结果相符的是,40-80μM的RS-21607可以剂量依赖性地抑制大鼠卵母细胞的体外自发成熟,但100μM的RS-21607对大鼠卵母细胞有毒性作用,提示MAS可能参与了大、小鼠卵母细胞的自发成熟过程;注射PMSG 48h和PMSG处理48h再注射hCG后3h,6h,9h分别对大鼠卵巢CYP51蛋白进行免疫组化,DAB显色,结果显示各处理间结果差异不明显,间质细胞和膜细胞染色较深,小、中有腔卵泡颗粒细胞及卵丘细胞着色较深,所有卵母细胞均只有背景显色,结果提示MAS可能参与大鼠卵泡生长过程,本研究结果与Vaknin等(2001)报道CYP51蛋白优先在卵母细胞中表达,MAS是在卵母细胞中产生的结果不一致。