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目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithioearbamate,PDTC)对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测TRAIL(1、10、100ng/ml)、100μmol/mlPDTC及TRAIL(1、10、100ng/ml)+100μmol/mlPDTC时Raji细胞的生长抑制率;原位末端酶标记技术(TUNEL)检测Raji细胞凋亡指数(AI)。Western blot检测单独应用TRAIL(1、10、100ng/ml)、100μmol/mlPDTC及TRAIL(1、10、100ng/ml)联合100μmol/mlPDTC处理Raji细胞24h后,Raji细胞表达膜蛋白DR4、DR5及核内蛋白NF-κB的情况。结果:1. 1ng/ml、10ng/ml TRAIL组12h抑制率分别为-35.52±5.64(%)及-15.07±2.03(%);100ng/mlTRAIL组12 h抑制率为6.68±1.17(%),并且呈时间依赖性(P<0.05)。100μmol/mlPDTC组12 h抑制率为1.01±0.21(%),48 h抑制率为2.12±0.33(%),无明显抑制作用。TRAIL(1、10、100ng/ml)联合100μmol/ml PDTC后,12h抑制率分别1.18±0.51、4.96±1.34、14.63±2.57(%),均显著高于相同浓度TRAIL及PDTC单用组(p<0.01),并且呈时间依赖性(P<0.05)。10ng/ml、100ng/mlTRAIL联合PDTC对Raji细胞的增殖的抑制作用均具有协同效应,其中100ng/mlTRAIL联合PDTC具有显著的协同效应。2.联合用药组、TRAIL(100ng/ml)组及48 h 100μmol/ml PDTC凋亡指数与细胞对照组比较均有统计学意义(p<0.05)。TRAIL(100ng/ml)联合PDTC时细胞凋亡指数最高为79.49±1.40(%),较TRAIL100ng/ml(28.84±2.47%)有显著性升高, 1ng/ml、10ng/ml TRAIL联合PDTC作用后Raji凋亡细胞也均显著高于相同浓度TRAIL及PDTC单用组(p<0.01),并且呈时间依赖性。与MTT法检测结果具有一致性。3.作用24 h后,TRAIL(1、10、100ng/ml)三组膜蛋白DR4、DR5吸光度值较细胞对照组均有统计学意义(P<0.05,p<0.01,p<0.01),而与相同浓度的TRAIL联合PDTC100μmol/ml组却无显著性差异(p>0.05)。细胞对照组核内蛋白NF-κB(p65)为0,TRAIL(1、10、100ng/ml)三组NF-κBp65吸光度值分别0.7835±0.019、0.6607±0.0310、.5194±0.024,均显著高于相同浓度的TRAIL联合PDTC组核内蛋白NF-κBp65吸光度值(0.3377±0.046、0.4837±0.012、0.6578±0.025)。100μmol/mlPDTC组膜蛋白DR4、DR5及核内蛋白NF-κBp65吸光度值均与细胞对照组相同。结论:1.TRAIL对Raji细胞的生长具有抑制作用,但作用不敏感。NF-κB抑制剂PDTC能显著增强TRAIL对Raji细胞的抑制作用。2. TUNEL检测结果显示PDTC主要是通过增加肿瘤细胞凋亡来增强TRAIL对Raji细胞的抑制作用。3.本实验证实:TRAIL通过与细胞膜上的死亡受体(DR4、DR5)结合而激活凋亡信号途径,TRAIL在激活凋亡信号途径的同时也激活了核蛋白NF-κB。PDTC通过抑制NF-κB的活化来增加Raji细胞对TRAIL诱凋亡的敏感性,死亡受体的表达不参与这一变化过程。