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稻瘟病和恶苗病是水稻的重要病害,对全球水稻生产造成极大危害。水稻病害的化学防治方法已经产生了严重的负面影响,开发生物防治途径对人类社会的可持续发展具有重要的意义。本论文从334株放线菌里进行活性菌株筛选,并且以筛选出来的菌株及其次生代谢产物为研究对象,通过生物活性测定、化合物的分离纯化等一系列实验,对这两株菌的生防作用进行了较为系统的研究。结果如下:
一、从334株放线菌中通过离体实验,初步筛选出抗稻瘟菌活性较好的菌株6株;抗恶苗菌活性较好的菌株4株。通过离体和活体实验对这些菌株进行复筛,最后筛选出抗稻瘟病活性强的菌株YIM30997;对恶苗病有较强抑制作用的菌株YIM31339。
二、用1<#>、61<#>以及301<#>培养基对菌株YIM30997以及YIM31339进行发酵,通过抑制孢子萌发、抑制菌丝生长以及活体防治作用等实验,结果发现,用301<#>培养基对菌株YIM30997进行发酵所得的发酵产物对稻瘟病的活体防治效果最好,达到了96.2%,和阳性对照三环唑的防治效果无显著差异,因此选择301<#>培养基为YIM30997的放大发酵培养基。以同样的方法筛选出1<#>培养基作为YIM31339的放大发酵培养基。
三、对YIM30997以及YIM31339进行5L发酵,发酵液及菌丝体经过处理分成发酵上清液乙酸乙酯萃余液(FR)、上清液乙酸乙酯萃取液(FE)、菌丝体提取物乙酸乙酯萃余液(MR)、菌丝体提取物乙酸乙酯萃取液(ME)、发酵总提物(T)等5个部分,对这5个部分进行活性测定,结果表明:YIM30997的ME对稻瘟菌的孢子萌发以及菌丝生长有抑制作用;而FR对稻瘟病有活体防治作用。YIM31339的ME对恶苗菌的孢子萌发以及菌丝生长有抑制作用,并且对恶苗病的活体防治效果也达到76.3%,超过了多菌灵74.9%的防治效果。
四、采用活性追踪的方法,从菌株YIM30997的次级代谢产物中分离到杀黑星菌素A,经测定,其对稻瘟菌的生长有强烈的抑制作用。从YIM31339的次生代谢产物中分离到2个化合物,分别是寡霉素A和寡霉素C。这两个化合物对恶苗菌的生长均有强烈的抑制作用。