自1967年Thomas E. Starzl成功实施首例肝移植(Liver Transplantation,LTx)以来,历经近40年发展,目前LTx已成为终末期肝病最为有效的治疗手段。随着临床LTx的发展,术后长期生存的病例不断增多,但肝移植术后胆道并发症的发生率仍徘徊在5. 8 %～24. 5 % ,与胆道并发症相关的病死率为6. 0 %～12. 5 %。因此处理好LTx术后胆道并发症对提高肝移植患者的长期生存率及生活质量具有非常重要意义。但是,直至目前,发生移植后胆管并发症的确切病因及发病机制尚不十分清楚。可能与多种因素有关,包括缺血性胆管损害( ischemia-type biliary lesions, ITBL)、免疫性胆管损害及感染性胆管损害。目前ITBL被认为是非外科性移植物胆管树损害的主要原因。ITBL的发病可能涉及以下几个方面: (1)冷保存-再灌注对胆管壁组织的直接损伤; (2)胆管微血管床的损伤;( 3)移植物动脉化延迟造成的胆管热缺血损伤; ( 4)疏水性胆盐对胆管上皮细胞的毒性作用。目前的研究表明,肝内胆管的血供主要来自于肝动脉。肝内胆管则由左右肝动脉分支形成的非轴性动脉网供血,在汇管区内与门静脉分支伴行。肝动脉的终末端与门静脉终末端的分配静脉同时分成更细小的微血管,并与血窦相联。胆管组织,尤其是胆管上皮细胞更易受冷保存-再灌注及肝动脉缺血损伤,具体原因目前尚不十分清楚。近年来,微循环及其血管内皮细胞在冷保存-再灌注损伤中的作用越来越引起研究者的重视。已有研究表明,冷保存-再灌注可引起肝、肾等组织器官的血管内皮细胞损伤和微循环障碍,从而进一步加重组织的缺血-再灌注损伤。由此可以推测,胆管内皮细胞及其周围胆管血管丛在胆管冷保存-再灌注损伤以及胆管周围血管丛的微循环缺血的病理生理过程中起着至关重要的作用。也可能是供肝长时间冷保存后易造成肝移植术后胆管组织严重损伤和ITBL发生的重要原因之一。本课题将在建立大鼠肝脏原位移植模型的基础上:①建立肝脏移植术后肝内胆管周围血管丛微循环障碍动物模型;②探讨肝内胆管周围血管丛微循环障碍对胆管上皮细胞的影响;③探讨外源性r-VEGF165对研究微循环障碍在移植肝胆管上皮细胞损伤中的作用,以及对胆管周围血管丛微循环障碍时所致的的肝内胆管及管周血管丛损伤是否具有保护作用,以期进一步阐明移植肝胆管上皮细胞损伤的发生机制,为临床肝移植术后ITBL的防治提供理论参考。方法与结果:1、实验动物SD大鼠采用改良Gao’s大鼠肝脏移植手术方式重建肝动脉。在此肝脏移植实验的基础上,将各组实验动物按照给予不同干预因素再随机分为三个实验组,于首次手术后3天行二次手术:A组:肝动脉结扎(HAL)组。包括A1:UW液保存2h;A2: 8h;A3:16h;B组:肝动脉微球注射+肝动脉结扎(MS+HAL)组,C组:对照(SO)组,同样分亚组。设术后3d、7d两个时相点,每一时相点6对大鼠。选取P8组进行了组织病理学观察及评分:移植术后HAL组胆管损伤、肝小叶坏死、较SO组严重,而MS+HAL组则更加严重,统计学比较有显著性差异(P<0.05)。2.对第一部分实验标本行免疫组化检测,结果表明PCNA、CK-19、F-Ⅷ-Ag、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFR-2、VEGFR-3均有蛋白表达,其中2h表达最强,16h表达最弱,8h介于二者之间,并且7d均高于3d。同组内不同时间段或同一时间段不同亚组间比较,仅少数无显著性差异。VEGFR-1则无蛋白表达。选取P2h亚组作RT-PCR显示,各亚组均有VEGF及其受体的mRNA表达,相对密度比值显示同组内不同时间段或同一时间段不同亚组间比较,仅少数无显著性差异。并且7d均高于3d。3.在第一部分的二次手术基础上,选取P8h组,在给予不同干预措施的同时给予r-VEGF165 2ml( 2.5ng/ml)腹腔注射,每日2次,同样取术后3d、7d时间段,每时段每组6只动物。组织病理学观察及评分:移植术后各实验组组胆管损伤、肝小叶坏死、较对照组组减轻,统计学比较有显著性差异(P<0.05)。免疫组化检测PCNA、CK-19、F-Ⅷ-Ag、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFR-2、VEGFR-3均有蛋白表达,其中实验组P8HALV组表达最强,对照组P8MSHAL组表达最弱,其余各组介于二者之间,并且7d均高于3d。同组内不同时间段或同一时间段不同亚组间比较,仅少数无显著性差异。VEGFR-1仍无蛋白表达。RT-PCR显示,各亚组均有VEGF及其受体的mRNA表达,相对密度比值显示同组内不同时间段或同一时间段不同亚组间比较,仅少数无显著性差异。并且7d均高于3d。结论:1.成功建立的大鼠肝脏移植术后胆管周围血管丛微循环障碍动物模型,是研究肝脏移植术后胆管周围血管丛微循环缺血对胆管上皮细胞的影响的较理想模型;2.大鼠肝脏移植术后胆管周围血管丛微循环缺血可刺激胆管上皮细胞过度表达VEGFA、VEGFB、VEGFC及其受体VEGFR-2、VEGFR-3蛋白;其可以改善胆管周围血管丛微循环缺血,并诱导胆管周围血管丛的增生,进而促进胆管上皮细胞的修复;3.外源性r-VEGF165通过改善移植肝脏胆管周围血管丛微循环,对移植肝胆管上皮细胞损伤发挥保护作用。